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高效液相色谱法 天然产物在线鉴定技术 高通量筛选技术 其他：逆流色谱、膜分离 高效液相色谱法 吸附原理：相似相吸 影响吸附过程的三要素： 吸附剂（固定相）， 溶质（被分离物质）， 溶剂（洗脱剂，展开剂，流动相） 正相色谱： 固定相极性大，如水、缓冲液等； 流动相极性小，如氯仿、乙酸乙酯等。 载体：硅胶(含水可达17%)，硅藻土，纤维素等。 用途：分离极性大或水溶性成分，如苷类、糖、生 物碱等。 洗脱顺序：极性小的物质先被洗脱出来。 1. 结构流程 梯度淋洗方式 主要部件 (2) 进样装置 (3) 高效分离柱 HPLC 色谱柱结构 (4) 检测器 工作原理： 基于Lambert-Beer定律，即被测组分对紫外光或可见光具有吸收，且吸收强度与组分浓度成正比 A=lg Io/I=εbc ????其中A为吸光度（消光值）,Io为入射光强，I为透射光强，ε为样品的吸光度（消光系数）b为光程长，c为样品浓度。也有人将其归为通用型检测器： 原因：约有80％的分析样品具有紫外吸收,可以使用这种检测器检测。 优点: a: 灵敏度高，检测下限约为 10-6 g／ml b: 线性范围广 C: 对温度和流速不敏感，适于进行梯度洗脱 荧光检测器 原理: 物质的分子或原子经光照射后，有些电子被激发至较高的能级，这些电子从高能级 跃至低能级时，物质会发出比入射光波长较长的光，这种光称为荧光。荧光检测器就是在样品的激发波长处检测发射光的强弱. 在样品浓度足够低时,下，荧光强度与如射光强度,量子效率及样品浓度成线形关系。 荧光强度: F=I0 εφ L C 荧光检测器是一种选择性检测器 不到20%的物质使用这种检测手段,许多药物如喹诺酮类药物采用这种检测方法. 优点: a: 灵敏度非常高(灵敏度在目前常用的HPLC检测器中最高 )，其检出限可达10-9g/ml，(比紫外检测器高2—3个数量级，适合于痕量分析 ) b: 可以用于梯度洗脱 c: 对仪器的稳定性（如温度和压力的稳定性）依赖较小 d: 选择性好，优于紫外 例子：花生酱提取物中衡量黄曲霉素的荧光检测法 缺点: a:适用范围有一定的局限性 –只适用于有荧光基团＆衍生化之后有荧光基团的化合 b: 定量分析时线性范围较窄 它适合于稠环芳烃、氨基酸、胺类、维生素、蛋白质等荧光物质的测定 二极管阵列检测器（diode-array detector, DAD） 原理: 光电二极管阵列（或CCD阵列，硅靶摄像管等）作为检测元件的UV-VIS检测器。它可构成多通道并行工作，同时检测由光栅分光，再入射到阵列式接受器上的全部波长的信号，然后，对二极管阵列快速扫描采集数据，得到的是时间、光强度和波长的三维谱图。 与普通UV-VIS检测器不同之处: a: 普通UV-VIS检测器是先用单色器分光，只让特定波长的光进入流动池，只能检测某一个特定波长的色谱峰。 而二极管阵列UV-VIS检测器是先让所有波长的光都通过流动池，然后通过一系列分光技术，使所有波长的光在接受器上被检测。 b:普通UV-VIS检测器只能得到二维的谱图,而DAD可以得到三维图谱. 光电二极管阵列检测器 三维：光谱-色谱图 示差折光检测器 (RID) 原理: 　　　化合物的折光率不同,光会偏转。光偏转的程度与样品的浓度成正比。 根据不同浓度的物质具有不同折射率来进行组分检测的。 　　　溶液的折射率是溶剂（流动相）和溶质（样品）各自的折射率乘以各自的摩尔浓度之和． 　　　溶有样品的流动相与流动相本身之间折射率之差就表示样品在流动相中的浓度．原则上，凡是与流动相折射指数有差别的样品都可以测定它的浓度． 通用型检测器 (浓度检测器 ) 　　检测限可达１０－６ ～１０－７g/ml 优点: 通用性强，操作简便 蒸发光散射检测器 (ELSD) 原理: 色谱柱流出液进入雾化器形成微小液滴，与通入的气体 (通常是氮气，有时也用空气)混合均匀，经过加热的漂移管，蒸发除去流动相，样品组分形成气溶胶，用强光或激光照射气溶胶，产生光散射，用光电二极管检测散射光。 特点： ELSD最大的优越性在于能检测不含发色团的化合物: 如：碳水化合物、脂类、聚合物、未衍生脂肪酸和氨基酸等，并在没有标准品和化合物结构参数未知的情况下检测未知化合物 。 响应不依赖与样品的光学特性，任何