[生物学]第4章 抗体的制备及处理1.pdfVIP

食品免疫学检测技术 第四章 抗体的制备及处理 第一章 绪论 第二章 抗原 第三章 抗体 第四章 抗体的制备及处理 第五章 常见免疫学检测技术 第六章 免疫学检测技术在食品检测中的应用 第四章 抗体的制备及处理1 （2学时） l 一节 多克隆抗体的制备 l 二节 单克隆抗体的制备 第一节多克隆抗体的制备 多克隆抗体(pAb)是研究和诊断领域广泛使用的 有效工具，主要用于免疫印迹、放免、ELISA、 间接和直接荧光抗体试验、红细胞凝集试验、 免疫组化、免疫沉淀试验、免疫扩散、亲和层 析、酶学以及分离基因产物等 多克隆抗体是由多个B细胞克隆产生的，针对某 一复杂抗原多个表位的不同抗体的混合物，又 称抗血清或免疫血清 克隆抗体的制备 由不同B细胞克隆产生的针对抗原 上多种抗原决定簇的多种抗体混 合物 一、制备多克隆抗体的基本条件 抗原 实验动物 免疫 抗血清鉴定 抗血清收集 抗血清保存 二、多克隆抗体制备流程 （一）免疫原的制备 （二）实验动物的选择 （三）免疫的实施 （四）免疫血清的收集/采血 （五）免疫血清的鉴定/筛选 （六）免疫血清的保存 （一）免疫原的制备 1. 免疫原制备方法参见 2章 （抗原） 2. 制备多克隆抗体 免疫原的纯度要求十分 严格，一般要求电泳纯或层析纯。纯度越 高，特异性越好 3. 考虑抗原的大小、聚集状态及构象状态 5kDa、小的多肽、是否天然蛋白 4. 避免细菌污染和杂质混入（如内毒素，影 响免疫应答的一些化合物） （二）实验动物的选择 1. 抗原与免疫动物的亲缘关系，如兔、小 鼠、大鼠、豚鼠、山羊、绵羊、鸡等 2. 抗血清需要量 3. 动物性别、年龄 雌性攻击性小、低剂量免疫可能更敏感、 更高的循环抗体、较强的免疫反应 4. 抗原性质：蛋白质抗原 多数动物都适合 但一些特殊的如IgE对绵羊，胰岛素 家 兔，胃蛋白酶原对山羊，不易产生抗体 （三）免疫的实施 1. 抗原用量：首免小鼠50 400 g ，大鼠100 1000 g，兔200 l000 g ，羊250 5000 g可溶性抗原加上弗氏完全佐剂 ☆加强免疫为首免剂量的1/5 ～2/5 ☆抗原的剂量非常关键，因为高剂量的抗原易 导致 亲和力B细胞的活化，而低剂量抗原能引起高亲 和力B细胞活化 （？） ☆剂量还与抗原种类、免疫途径、免疫次 数、免疫周期等其它条件关联 （三）免疫的实施 2. 免疫途径：静脉(i. v.)、肌肉 （i. m.)、皮下 （s. c.)、腹膜内（i. p.)、皮内(i. d.) 等 ☆静脉受抗原形式、物种、注射量限制 ☆腹腔注射途径在小鼠中经常使用 ☆皮下注射途径在兔等经常使用 ☆淋巴结、脾可直接注射 ☆足垫免疫也被使用 不同注射途径比较见表： （三）免疫的实施 3. 免疫间隔时间：是抗血清制备中的重要因 素，特别是首免和二免 ☆若在抗原识别阶