一株能与盾叶薯蓣细胞共培养的内生真菌分离及其生物学特性-论文.pdfVIP

一株能与盾叶薯蓣细胞共培养的内生 真菌分离及其生物学特性 袁丽红 陆玉婷 许琳 欧阳平凯* （南京工业大学制药与生命科学学院 南京 210009） 摘要: 从盾叶薯蓣根状茎中分离到一株在离体条件下与盾叶薯蓣愈伤组织协调生长的内生真菌（RE0105 ）。 该菌在多种培养基上均未见孢子产生。测定了该菌的 ITS1-5.8S rDNA-ITS2 序列并构建了系统发育树，在 系统发育树中内生真菌 RE0105 与Libertella 属形成一个类群，具有较近亲缘关系。内生真菌 RE0105 能够 产生与宿主植物相同的代谢产物－薯蓣皂苷元。对内生真菌 RE0105 培养的生长特性研究表明，富含有机 营养的培养基有利于其生长；盾叶薯蓣细胞提取物可明显刺激内生真菌生长；20μmol/L 生长素NAA 和2,4-D 能够促进内生真菌RE0105 的生长。200 μmol/L 细胞分裂素 KT 和 BA 对 RE0105 生长具有一定的促进作用， 但与生长素相比，细胞分裂素对 RE0105 生长的刺激作用较小。蔗糖、葡萄糖、果糖、乳糖、木糖和硝酸 铵是内生真菌 RE0105 生长的良好碳源和无机氮源，氯化铵和硫酸铵对内生真菌生长具有明显抑制作用， 并且显著影响内生真菌 RE0105 形态特征。 关键词：培养特性；薯蓣皂苷元；离体共培养；ITS1-5.8S rDNA-ITS2 区域；系统发育分析 中图分类号：Q939.5 文献标识码：A 文章编号： 植物内生真菌是生活在植物组织和细胞内不引起宿主植物明显感染症状的真菌，普遍存 在于植物体内，从目前已研究过的植物看，未发现没有分离到内生真菌的植物（Arnold et al., 2000 ）。尽管内生真菌在植物体内的生物量微不足道，但其长期生活在植物体内这一特殊环 境中，并与寄主协同进化，二者间形成了互惠共生关系：一方面内生真菌可以从宿主植物中 吸取营养，并得到保护；另一方内生真菌能够促进宿主植物生长发育,增强宿主植物对生物 胁迫(食草动物、昆虫、病原菌)及非生物胁迫(高温、干旱、高盐等) 的抗逆性（黎万奎和胡 之璧，2005) 。由于自然条件下内生真菌－植物所形成的共生体特征不明显以及内生真菌人 工接种的困难（Latch G C Christensen, 1985 ；Johnson et al.,1986; Kearney et al., 1991 ），绝 大多数内生真菌－植物共生关系未被认识和研究。目前有关内生真菌与宿主植物共生关系的 研究主要是基于有性世代内生真菌 Epichlöe (Clavicipitaceae, Ascomycota) 和无性型 Neotyphodium 与两种禾本科植物高羊茅和多年生黑麦草相互作用的研究结果。此外，在研 究内生真菌作用机理实验中，研究者建立的多是实生苗“ 内生真菌感染植株”和“未感染植株” 实验种群。从生态学角度讲，任何生活在自然环境中植物体均存在内生菌，即使是无菌苗， 进入温室或大田后其它微生物也会定殖于其体内，从而无法判断是内生真菌作用的结果还是 来自于环境中其它生物作用的结果。因此，利用田间或温室建立的内生真菌－宿主植物共生 体研究二者作用机理存在一定问题。 基于内生真菌在与宿主植物长期生活和协同进化过程中二者间的互惠共生关系，在实验 室离体条件下建立内生真菌－宿主植物细胞共培养体系可为研究内生真菌在与宿主植物相 互作用机理提供一种可行的研究体系。目前有关离体条件下能与宿主植物细胞共培养的内生 真菌的研究尚未见报道。 盾叶薯蓣(Dioscorea zingiberensis C.H. Wright)为薯蓣科薯蓣属植物，是我国特有的、具 基金项目：国家自然科学基金项目（No.） 作者简介：袁丽红（1965－），女，教授 *通讯作者：欧阳平凯，教授，博士生导师. E-mail: ouyangpk@ 1 有重要经济意义的药用植物，从其根状茎提取的薯蓣皂苷