微生物细菌菌种制备技术规程.doc

规程–Ⅱ 微生物（细菌）菌种检定技术规程 中国检验检疫微生物菌种保藏管理中心 前 言 微生物（细菌）菌种的检定工作是微生物资源收藏单位的一项重要工作，也是共享资源的重要技术前提。为了规范微生物（细菌）菌种检定的工作，确保菌种质量，制定本技术规程。 菌种的检定工作科学性较强，在实际工作中，如果操作检定不当，观察结果不认真仔细，极易造成误判，从而导致严重的后果。本规程从菌种的菌落形态，菌种的生长特性，以及菌种的生物学特性等方面提出规范性要求，确保菌种的准确无误。 规程起草单位：中国检验检疫微生物菌种保藏管理中心 规程起草人：赵贵明、王娉、杨海荣、陈颖、赵勇胜 版本：2014-07 目 录 前言--------------------------------------------------------------------第 1 页 1 范围------------------------------------------------------------------第 3 页 2 规范性引用文件--------------------------------------------------------第 3 页 3 术语的定义------------------------------------------------------------第 4 页 4 要求------------------------------------------------------------------第 4 页 5 实验方法--------------------------------------------------------------第 6 页 附录A （资料性附录）培养基成分及配制方法--------------------------------第 8 页 微生物（细菌）菌种检定技术规程 1 范围 本规程规定了微生物（细菌）菌种的检定方法。 本规程适用于常见细菌菌种的检定。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本规程的引用而成为本规程的条款。鼓励和应用本规程使用这些文件的最新版本。 GB/T1.1—2000《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编号规则》 GB/T1.2—2002《标准化工作导则 第2部分：标准中规范性技术要素内容的确认方法》 《中华人民共和国药典》2010年版二部 无菌检查法 《中华人民共和国药典》2010年版三部 无菌检查法 EN1659体外诊断方法，微生物培养基术语和定义 EN12322 体外诊断方法医疗设备，微生物培养基、培养基性能指标 美国国家临床试验室标准委员会（NCCLS）标准 世界卫生组织（WHO）编《实验室生物安全手册》中文第三版 伯杰细菌鉴定手册（第九版），注意采纳最新版本的可能性 3 术语和定义 本条款规定了与质量控制相关的通用定义以及培养基和质量质控相关的术语。 3．1 质量控制 qualitycontrol 为达到质量要求所采取的操作检定技术和活动 3．2 培养基 cultural medium 液体、半固体、或固体形式的，含天然或合成成分，用于保证微生物繁殖或保持其活力的物质。 3．3 参考菌株 reference strain 鉴定定义到属、种水平的菌株。（有可能到血清型、亚型），按菌株生物学特性进行分类描述，并有明确的菌株的来源。菌种检定时的阳性对照株应为国家或国际标准菌种的模式菌种。 3．4 参考原株 reference stocks 将实验室分离到的转接一代后得到的一套完全相同的独立菌株。 3．5 工作菌株 working culture 参考菌株转接一代后获得的菌株。 3．6 引种 指从中国微生物菌种保藏管理委员会组织系统（CCCCM）或布达佩斯条约微生物国家保藏单位引进的菌种。 4 要求 4．1 菌落形态 在有氧、兼性厌氧或厌氧条件下，经36°C±1°C（或最适温度）培养18～°C±1°C培养，18～～°C冰箱中保存一周），故应经常更换新配试剂。 4.4 Hugh—leifson 培养基（O/F试验） 4．4．1 培养基的配制和实验方法 按GB/T4789《食品安全国家标准 食品微生物学检验》进行。 4．4．2 结果 反应类型 封口的培养基 开口的培养基 发酵型（F） 产酸 产酸 氧化型（O） 不变 产酸 产碱型（A） 不变 不变 4．5 结果解释 依据4.2、4.3、4.4的结果，指示菌种的检定方向。 5 试验方法 5．1 设备器材 培养箱、干烤箱、压力蒸汽灭菌器、灭菌吸管、灭菌平皿、灭菌试管。 5．2 试验操作总则 5．2．1 所有操作应在符合生物安全规定的微