公开课微生物的实验室培养人教版选修1.ppt

选择培养基的应用 问题讨论 若硝化细菌、圆褐固氮菌、不固氮的蓝藻混合在一起，我们配置什么样的培养即可以将三种微生物分离？ 比较消毒与灭菌(原理相同） （三）平板划线分离法 （四）稀释涂布平板法 稀释涂布法 * 课题1 微生物的实验室培养 1.提供营养和条件 2.防止污染 一.培养基： 微生物生存的环境和营养物质 1.基本成分： 思考：微生物“吃”什么？ 碳源、氮源、水、无机盐 ⑴碳源 无机碳源： 有机碳源： CO2、CO32-、HCO3- 牛肉膏、蛋白胨等 自养微生物 异养微生物 ⑵氮源 无机氮源： 有机氮源： NH4＋、NO3- 牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等 注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的： 碳源、氮源、能源。 一.培养基： 微生物生存的环境和营养物质 2.特殊营养： 维生素（如乳酸杆菌）、碱基等 （牛肉膏、酵母膏、蛋白胨中含有） 3.pH、氧气的需求： 霉菌（pH调至酸性） 细菌（pH调至中性或微碱性） 厌氧生物需提供无氧条件。 一.培养基： 微生物生存的环境和营养物质 4.培养基种类 固体培养基 液体培养基 有无 凝固剂琼脂 分离 鉴定 工业 生产 化学成分： 物理性质： 天然培养基 合成培养基 考点1、微生物的实验室培养 一、培养基的分类 加入青霉素的培养基——分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基——分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基——分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基——分离自养型微生物 伊红美蓝培养基——鉴别大肠杆菌 光 铵盐、硝酸盐 CO2 不固氮的蓝藻 有机物 N2 糖类等含碳有机物 圆褐固氮菌 氨 氨 CO2 硝化细菌 能源 氮源 碳源 不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 调节pH 2、成分 水、碳源、氮源、 无机盐、生长因子 (生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的 化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶) 真菌：5～6 细菌：6.5 ～ 7.5 有时会加一定量的氯化钠以维持一定的渗透压 5. 配制原则 ⑴目的明确： ⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当 ⑶适宜的pH值： 有机碳源 异养型： 根据微生物的种类、培养目的选择原料 自养型： 不加碳源 加入缓冲剂 细菌偏碱，真菌偏酸 （CO2碳源） 生产 科研 2.无菌范围： 实验操作空间消毒 操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌 实验操作过程 二.无菌技术： 防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌： 酒精灯旁操作 超净工作台 灭菌 消毒 芽孢和孢子能否被消灭 消灭微生物的数量 理化因素的作用强度 比较项 较为温和 部分生活状态 的微生物 不能 能 全部微生物 强烈 高压蒸汽灭菌 （湿热灭菌） 洒精灯灼烧灭菌 干热灭菌 （1）灭菌方法： 3、常用的灭菌和消毒的方法 培养基、无菌水、 各种耐高温的玻璃金属器具 100kPa、121 ℃下维持15-30min 需要保持干燥 耐高温的玻璃金属器皿 160-170 ℃下加热1-2h 接种环等金属器具 1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 …… (2)消毒的方法： 3.常用的消毒与灭菌的方法 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 单个 或少数菌体 2.特征： 大小、形状、光泽度、 颜色、透明度等。 3.功能： 1.定义： 三.菌落 鉴定菌种的重要依据 固体培养基上 大量繁殖 子细胞群体 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml NaCl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 四.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算： 培养基用量 2.称量： 3.溶化： 牛肉膏黏稠，用称量纸称取 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖 牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 →取纸 →蛋白胨、NaCl →琼脂 →补水定容 4.调pH、分装、封口： 5.灭菌： 6.倒平板： 培养基、培养皿 分散成单个细胞, 形成单个菌落 7．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板