显微光学成像3.doc

51.非线性光学效应（Nonlinear optical effects）的种类 主要的种类有：双光子吸收（2PEF）,三光子吸收（3PEF）二次谐波生成（SHG）,三次谐波生成（THG）,相干反斯托克斯拉曼散射（CARS）。——————我觉得只要名字就够了。 利用Jablonski Energy Diagram解释双光子吸收过程 首先分子对两个能量为hv的光子进行直接吸收，将电子激发到受激能级S1上，然后再从能级S1转化到一个较低的能级上，最后电子从这个能级回到基态能级S0同时产生比入射光子能量更高的hvF光子。这就是双光子过程引起上转换辐射的基本过程。 为什么双光子显微镜可以实现高度局域的激发（High localization of the excitation） 因为在焦点处光子的密度是最大的。密度最大的原因是双光子吸收是激发光强的平方的函数。当从脉冲激光源发出的光子被高NA的物镜聚焦后，光子的密度越来越大，这使得双光子吸收发生的概率越来越大。而焦点处的光子密度是最大的，所以双光子吸收的概率达到最大。 什么是双光子吸收截面（Two-photon absorption cross-section） 双光子吸收截面用于在微观上描述分子双光子吸收的能力强弱。它与双光子吸收系数a2有图中公式关系----这个我还不确定定义是什么 双光子显微镜的组成 --红色或者近红外波长的短脉冲（皮秒或者飞秒）激光器，比如钛蓝宝石锁模激光器。 --X-Y光栅扫描单元。 --倒置（或者正置）荧光显微镜 --光电探测器，比如光电倍增管（PMT） --数据采集处理系统 在双光子荧光显微镜中，为什么需要使用高强度飞秒脉冲激光 双光子吸收和光强成线性关系，因此在激发态产生的集聚数和光强平方成正比。而且分子的吸收截面往往不够大，所以需要用高峰值功率或者高聚集的激光束才会产生高效的双光子吸收。比如最常用的钛蓝宝石激光器，他能够提供高的峰值功率，而且由于脉冲持续的时间很短，所以激光的平均功率很低，热损伤比较小。 双光子荧光显微镜与共聚焦荧光显微镜的异同点 多光子荧光显微镜在生物成像中的优势与不足 什么是荧光寿命 当某种物质被一束激光激发后,该物质的分子吸收能量后从基态跃迁到某一激发态上,再以辐射跃迁的形式发出荧光回到基态.当激发停止后,分子的荧光强度降到激发时最大强度的1/e所需的时间称为荧光寿命。它表示粒子在激发态存在的平均时间,通常称为激发态的荧光寿命 为什么需要发展荧光寿命成像技术 利用荧光剂的荧光寿命作为增强对比的机制有很多优势。首先，荧光寿命对荧光剂的局部环境高度敏感，其的分辨力为研究生命系统动态活动提供了可能。而且相比与FRET，FLIM只需要测量供体的荧光寿命就可以测量能量转移。其次，FLIM不受荧光强度、浓度的影响，并且最大程度上与荧光剂的光之漂白无关，有些情况下还可以避免自体荧光的干扰。另外，尽管某些荧光剂的荧光光谱相似，但在不同环境下他们的寿命不同，因此寿命是更加敏感的环境测试量。