GB4789涉及的微生物常规检测技术PPT.ppt

生理生化试验-志贺氏菌 葡萄糖铵利用 原理：当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源且不需要尼克酸和某些氨基酸作为生长因子时，可以在葡萄糖铵培养基上生长。 生理生化试验-志贺氏菌 结果：阳性者斜面上有正常大小的菌落生长，阴性者不生长或生长极微小的菌落 意义 大肠埃希菌可利用铵盐作为唯一氮源，且不需要尼克酸作为生长因子-生长 生理生化试验-志贺氏菌 志贺菌属可利用铵盐作为唯一氮源，但需要尼克酸作为生长因子-不生长 变形杆菌和摩根氏菌属不能利用铵盐作为唯一氮源，补给尼克酸也不能生长-不生长 生理生化试验-志贺氏菌 西蒙氏柠檬酸盐利用 原理：当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源，同时利用柠檬酸盐为唯一碳源时，可以在葡萄糖铵培养基上生长。细菌生长时，分解柠檬酸生成碳酸盐，使培养基变碱 生理生化试验-志贺氏菌 结果：阳性者斜面上菌落生长，培养基由绿色转为蓝色，阴性者不生长 意义 肠杆菌科中大肠埃希菌属、志贺氏菌属、爱德华氏菌属和摩根氏菌属均为阴性 其它菌属多为阳性 生理生化试验-副溶血性弧菌 3.5%氯化钠TSI：-/+- 氧化酶试验：+ 革兰氏染色：-，棒状、弧状、卵原状等多形态，无芽胞，有鞭毛 生理生化试验-副溶血性弧菌 嗜盐试验：在无氯化钠和10%氯化钠胰胨水不生长或微弱生长，在7%氯化钠胰胨水生长良好 平板划线分离 培养特性观察 固体培养基 液体培养基 半固体培养基 菌落大小 形态 颜色（色素是水溶性还是脂溶性） 光泽度 透明度 质地 隆起形状 边缘特征及迁移性等 表面生长情况（菌膜、环） 混浊度 沉淀 色素 运动 扩散 培养特性观察 1. 铜绿假单胞菌2.志贺氏菌 3.枯草芽孢杆菌 形态结构观察 染色特性 形状 大小 排列方式 细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等） 革兰染色 革兰染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。 革兰染色 G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经石炭酸复红复染后就成红色 革兰染色 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色 革兰染色 生理生化试验-沙门氏菌 TSI：-/⊕+ 赖氨酸脱羧酶：+ 靛基质：-（如为+则需甘露醇+山梨醇+） 尿素（pH7.2）：- KCN：- 生理生化试验-沙门氏菌 三糖铁（TSI）试验 肠道杆菌科为革兰氏阴性菌，可发酵葡萄糖产酸。三糖铁琼脂试验是利用糖类发酵的不同与硫化氢产生与否，将肠道杆菌科各组细菌或各菌属加以初步区分 生理生化试验-沙门氏菌 使用接种针先穿刺至底部，而后于斜面作划线接种，培养18-24小时 生理生化试验-沙门氏菌 生理生化试验-沙门氏菌 三糖铁琼脂斜面培养基含有1﹪乳糖及蔗糖与0.1﹪葡萄糖作为发酵基质，且以酚红作为酸碱指示剂，如培养基由橘红转为黄色，表示有糖类发酵。 生理生化试验-沙门氏菌 斜面碱性（红色-）底部酸性（黄色+）产气或不产气（⊕或-产气时会造成琼脂裂开）：表示仅葡萄糖发酵。因微生物优先分解葡萄糖产酸，使培养基变黄 生理生化试验-沙门氏菌 但因葡萄糖含量低，斜面上产生的微量酸立即氧化而呈碱性反应，同时培养基中的蛋白质也随之利用而产碱，培养基底部则因氧张力较小，且微生物生长较慢，故仍维持酸性反应 生理生化试验-沙门氏菌 斜面酸性（黄色+）底部酸性（黄色+）产气或不产气（⊕或-） ：表示除了葡萄糖发酵外，乳糖与（或）蔗糖也发酵。由于乳糖与蔗糖浓度高，经继续发酵，可维持培养基斜面与底部保持酸性反应。 生理生化试验-沙门氏菌 斜面碱性（红色-）底部碱性（红色-）或无变化（橘红色）：表示无糖类发酵。而蛋白质则于有氧或厌氧条件下进行代谢产生氨，而使培养基呈碱性反应，如有氧与厌氧均发生蛋白质分解，则斜面与底部均呈碱性反应 生理生化试验-沙门氏菌 三糖铁琼脂培养基中含有硫代硫酸钠作为产生硫化氢的基质，且含硫酸亚铁作为检测此无色产物之指示剂，若微生物有硫化氢产生，会与亚铁离子作用生成不溶性硫化亚铁之沉淀，进而使培养基变黑 培养基变黑 斜面红色，底面黄色 制好的培养基 培养基全黄色 斜面、底部黄色，并产生H2S 斜面红色，底部黄色，产生H2S 底面黄色，并产生CO2 对照管 生理生化试验-沙门氏菌 为使结果准确，应于接种培养18-24小时内观察结果，以确保糖类尚未用尽，且蛋白质分解之碱性终产物尚未产生。