干酪乳杆菌胞壁蛋白酶提取条件优化及其水解特性研究.pdf

干酪乳杆菌胞壁蛋白酶提取条件优化及其水解特性研究 潘道东 童 敏 吴 振 宁波大学生命科学与生物工程学院 浙江宁波 315211 摘要 干酪乳杆菌细胞壁蛋白酶是其蛋白水解系统中一个关键的蛋白酶。采用Ca2+-free法研究干酪乳杆菌细 胞壁蛋白酶的提取方法，确定其最佳实验条件。菌体用含有30mmol/LCaCl2的50mmol/LTris-HCl(pH7.0) 缓冲液洗涤3次，然后用含有50.03mmol/LEDTA-Na2的50mmol/LTris-HCl(pH6.98)缓冲液悬浮,39.75℃保 温,60min后取出离心(4500r/min、20min、4℃)，上清液即粗酶液。用粗酶液与纯化后的酶分别水解各种酪蛋 白，粗酶较纯化后的酶能产生更高的ACE抑制能力，而纯化后的酶水解β-酪蛋白产生的抗ACE活性能力最强。 干酪乳杆菌；胞壁蛋白酶：血管紧张素转化酶 1009-7848(2011)07-0102-08 2010-11-10 国家自然科学基金项目；浙江省重 大科技专项(2010C12015)；国家农业科技成果 转化基金项目(2009GB2C220412) 潘道东，男，1964年出生，博士，教授 mL95％乙 白酶上 羊显著 最高。 制活性最低。 @@[1] 梁希月，李仁秋，杨向红.血管紧张素转化酶抑制剂的不良反应[J].河北医药，2000，22(1):70-71. @@[2] 王立平，廖铃，高莉莉，等.Lactobacillushelveticus9的酪蛋白水解作用研究[J].食品科学，2008，29(07)：286- 290. @@[3] Jakala,P.H.Vapaatalo.Antihypertensivepeptidesfrommilkproteins[J].Pharmaceuticals,2010,3(1):251-272. @@[4] 张赛赛，李恒星，沙莎，等.酶膜反应器水解酪蛋白连续制备ACE抑制肽的研究[J].中国食品学报，到2009，9 (6)：41-47. @@[5] PanD.D,LuoY.M,Tanokura.Antihypertensivepeptidesfromskimmedmilkhydrolysatedigestedbycell-free extractofLactobacillushelveticusJCM1004[J].FoodChemistry,2005,91:123-129. @@[6] SinsuwanS,RodtongS,YongsawatdigulJ.CharacterizationofCa2+-activatedcell-boundproteinasefromVirgibacil lussp.SK37isolatedfromfishsaucefermentation[J].FoodScienceandTechnology,2008,41:2166-2174. @@[7] FangG.B,Poolman.ProductionandutilizationofpeptidesinLactococcuslactis[J].MolecularMicrobiology,1998, 27(1107-1118. @@[8] 郭宇星，潘道东.瑞士乳杆菌细胞壁蛋白酶提取研究[J].食品科学,2007，10:421-424. @@[9] StefanitsiD,SakellarisG,GarelJ.ThepresenceoftwoproteinasesassociatedwiththecellwallofLactobacillus bulgaricus[J].FEMSMicrobiologyLetters,1995,128(1):53-58. @@[10]郭宇星，潘道东.乳酸乳球菌细胞壁蛋白酶的分离纯化[J].食品科学，2008，29(10):388-391. @@[11]BradfordM.Arapidandsensitivemethodforthequantitationofproteinusingtheprincipleofprotein-dyebinding [J].AnalyticalBiochemistry,1976,72:248-254. @@[12]KaetzelCS,RayDB.Immunochemicalcharacteriza