北京化工大学北方学院波谱分析课件-质谱课.pptVIP

1. 质谱法的发展历史 现在的有机及生物质谱法，不仅可以进行小分子到蛋白质及DNA等生物大分子的分子量测定和结构解析，而且通过对在生物学上具有功能的生物及有机分子的分析，还可提供有效的‘生物功能’信息。早在1994年美国《分析化学》杂志登载的质谱学综述中指出：‘生物质谱学的时代已经到来’。与之相应的是这十多年来，质谱分析方法确实在生命科学领域里很活跃，甚至对推动生命科学的整体发展起到了巨大作用，目前无论在基因组学、蛋白质组学，还是代谢组学，质谱技术已经成为最强有力的手段（或技术平台）之一（由此从有机质谱领域分出了生物质谱）。当然，世界科学界的兴趣从‘无机性’的物理世界开始转向神秘的有机生命的世界，也实属现代自然科学的一种趋势。 1886年，E. Goldstein在低压放电试验中观察到正电荷粒子，随后W. Wein发现正电荷粒子束在磁场中发生偏转，这些结果为质谱技术的诞生奠定了基础。 从二十世纪初（1910年），被誉为现代质谱学之父的英国科学家J. J. Thomson（发现电子）进行“阳粒子线分析”（positive ray analysis）研究的时代开始，直到F.W. Aston和A. J. Dempster等人开创的‘真正’质谱分析法及其应用的发展，这约40年可称之为质谱分析法的‘黎明期’。 上世纪50-60年代以后，真空技术、电子技术以及精密制造等技术的迅速发展，亦推动了质谱分析中新技术的开发。 （1）CI-MS：1966年，F.H. Field在M.S.B. Munson的协助下，根据离子—分子间多次碰撞发生高压气相离子-分子反应这一点，研制出了新型离子源，即‘化学电离离子源’( CI, Chemical Ionization , ion source )。 CI-MS的特点是，首先以电子轰击被称为反应气体（reactant gas）的CH4、H2、NH3等气体使其离子化，并发生离子-分子反应，产生CH5+ or C2H5+、H3+、NH4+等离子，然后与样品分子发生离子-分子反应，达到使分子离子化的目的，一般常产生 [M+H]+、[M-H]+等‘准分子离子’。因为是一种‘软’电离技术，与EI法相比，比较容易产生分子离子峰。 （2）FD-MS：1969年，H.D. Beckey开发了‘场解吸电离法’（FD, Field Desorption），这种离子源主要应用于难挥发性有机化合物的离子化。此技术比较广泛的使用了近10年，虽然，目前仍在使用，但是它的主要作用基本上被1981年发表的FAB-MS法所取代。 （3） FAB-MS：1981年，M. Barber等研制出了被称为‘快原子轰击电离法’（Fast Atom Bombardment, FAB）。它主要用于热不稳定、难挥发性以及低极性至较高极性的有机化合物的离子化，是目前比较常用的电离技术。 （4）LSI-MS：1966年，首先J.F. Hennequin等开发了主要使用于固体表面分析的二次电离质谱（SIMS: secondary ion mass spectrometry），后来又被进行多次改进。特别是1976年以后，此技术逐渐发展成为在有机质谱中常用的liquid SIMS（LSI-MS）。 1982年，A.L. Burlingame等进行了FAB ( 8keV, Xe )与 LSI ( 6keV, Cs+ ) 质谱的比较研究，表明二者提供的谱图（型）基本上一致。总之，FAB与LSIMS应用至今，大大提高了质谱分析法的应用面，例如，现实了使分子量从1,000扩大到3,000的相对大分子的测定。 （5）GC/MS：为了对混合物进行分离、分析，因此需要与具有分离能力的色谱手段连接使用。上世纪60年代首先完成了气相色谱技术与质谱仪的联用，简称‘色-质联用仪’（GC/MS）。GC/MS仪仍然是目前最成熟、应用最广泛的联用技术之一，但是，该技术受气相色谱以及EI（CI）电离对样品的极性和热稳定要求，对分析极性大、热不稳定有局限性。 进入80年代以后，质谱法的发展可以归纳为两个主要方面。 1984年前后由B.A. Thomson和 J.B. Fenn等人开发，但确立为软电离法是1987年以后，认为是目前最‘软’电离技术。1988年由J.B. Fenn等应用于测定一万Da分子量以上蛋白质分子后引起广泛重视。 如果在离子源被电离的样品分子质量为m，电荷为 z (e)，(S1)加速电压为V，（电场作用能量为：zV；则离子被加速的速度为v，获得动能为：1/2mv