生物合成药物学(第七章).pptVIP

第七章 生物合成药物的分离纯化工程学基础 一、概述 生物合成药物的分离纯化，其目的在于从发酵液或培养液中分离纯化成具有一定纯度、符合药典或其他法定标准规定的各种药物，又称发酵液的后处理或下游加工过程。这是生物工程中的一个重要组成部分，它不但决定产品的质量和安全性，也决定着产品的收率与成本。 生物合成药物的一般分离纯化方法 发酵液 预处理固液分离 初步纯化（提取） 高度纯化（精制） 成品加工 （1）发酵液的预处理与固液分离 预处理：酸化、加热降低发酵液的粘度，或加入絮凝剂使生物细胞或溶解的大分子杂质聚集成较大的颗粒，便于沉降除去。 分离方法：过滤和离心分离 （2）初步纯化 吸附法、离子交换法和溶剂萃取法：抗生素等小分子物质的提取； 沉淀法：蛋白质类生物活性物质的提取，也可用于抗生素等小分子物质的提取（起浓缩作用，但纯化的效果较差）； 双水相萃取和反胶束萃取：酶和蛋白质类生物药物的提取和分离； 超临界萃取：食品工业和生物工程； 超虑：大分子物质的脱盐与浓缩。 （3）高度纯化（精制） 离子交换层析、凝胶层析、亲和层析、聚焦层析、疏水层析等。 （4）成品加工 浓缩和结晶， 产物为注射用：在结晶前进行除菌和去热原（加入活性炭吸附经石棉虑板过滤），产品为固体须干燥。 二、发酵液的预处理和固液分离 发酵液的预处理（抗生素为例） （1）控制PH和一些高价金属离子的去除 草酸：改变发酵液胶体状态和去除Ca离子， 三聚磷酸钠：可去除Mg离子等 黄血盐：可去除Fe离子等 （2）杂蛋白质的去除 等电点沉淀法、变性沉淀法、加各种沉淀剂、加絮凝剂 （3）多糖的去除 酶将其转化为单糖，降低粘度，提高虑速 （4）有色物质的去除 离子交换树脂、离子交换纤维、活性炭等 2. 发酵液的固液分离 过滤：真空鼓式过滤机和板框压滤机 离心：管式离心机、叠片式离心机和三项倾析离心机 微生物细胞的破碎 机械法：高压匀浆法、高速珠磨法、超声波法 非机械法：化学渗透法、酶解法、冻结－融化法、干燥法等。 三、溶剂萃取法 传质速度快、分离效率高、便于连续操作和自动控制等优点。抗生素、有机酸、维生素和甾体激素等均用此法。 影响萃取的因素 PH值、温度、盐析作用、溶剂的选择 2. 反应萃取：抗生素的提取 3. 双水相萃取：蛋白质、酶、核酸的等生物大分子 4. 反胶束萃取：酶和活性蛋白质等生物物质 5. 超临界流体萃取：CO2、氨、水等 四、离子交换法 是利用某些生物药物能在溶液中形成带电粒子，与合成离子交换树脂之间结合力的差异来进行分离的方法。 1. 离子交换树脂的分类 强酸性阳离子交换树脂(-SO3H) 弱酸性阳离子交换树脂(-COOH,酚羟基） 强碱性阴离子交换树脂（三甲氨基等） 弱碱性阴离子交换树脂（-NH2,-NHR等） 2. 树脂和操作条件的选择 树脂选择：强碱性产物宜选用弱酸性树脂、弱碱性产物宜选用强酸性树脂、强酸性产物宜选用弱碱性树脂、弱酸性产物宜选用强碱性树脂 3. 离子交换操作条件的选择 操作过程：交换吸附、洗脱（解吸）和树脂再生 交换吸附：选取溶液在交换过程的PH值是该操作的基本条件； 洗脱（解吸）：是吸附的逆过程，洗脱条件和吸附条件相反，在酸性下吸附应在碱性条件下洗脱，在碱性条件下吸附应在酸性条件下洗脱； 树脂再生：让使用过的树脂重新获得使用性能的处理过程。 4. 应用实例 庆大霉素的提取和纯化： 苯乙烯强酸性阳离子交换树脂 吸附（PH7－7.5） 洗涤树脂 洗脱（1mol/L氨水） 树脂脱色 浓缩 酸化（PH4.5－5.5） 活性炭脱色 无菌喷雾干燥 成品 五、吸附法 吸附法是利用一些吸附剂，在适宜的PH条件下，使发酵液中所需的产物被吸附剂吸附，然后再用适当的洗脱剂将产物解吸，以达到浓缩和提纯的目的。 吸附的类型 物理吸附、化学吸附、离子交换吸附。 影响吸附的因素 吸附剂的性质、吸附物的性质、溶剂和温度的影响、PH值和其他组分的影响。 几种常见的吸附剂 按化学结构分：有机吸附剂如活性炭、纤维素、聚酰胺、大孔树脂等；无机吸附剂如白土、氧化铝、硅藻土等。 六、沉淀法 优点：简单、经济、浓缩倍数高等。 应用范围：抗生素、氨基