第八章荧光概要.ppt

☆间接荧光法 间接荧光法常用于某些阴离子如F?、CN?等的分析，它们可以从某些不发荧光的金属有机配合物中夺取金属离子，释放出能发荧光的配位体，从而测定这些阴离子的含量。 MY + nF? = MFn + Y (不发荧光) (可发荧光) ☆催化荧光法 某些反应的产物虽能发荧光，但反应速度很慢，荧光微弱，难以测定。若在某些金属离子的催化作用下，反应将加速进行，利用这种催化动力学的性质，可以测定金属离子的含量。如铜、铍、铁、钴、锇、银、金、锌、铅、钛、钒、锰、过氧化氢及氰离子等都可采用这种方法测定。 2. 有机化合物的分析 脂肪族化合物能发荧光的不多，但也有许多脂肪族化合物与某些有机试剂反应后的产物具有荧光性质，可用于它们的测定。 芳香族化合物具有共轭结构，多能发射荧光，可以直接进行荧光测定。为了提高测定方法的灵敏度和选择性，常使某些弱荧光的芳香族化合物与某些有机试剂反应生成强荧光的产物进行测定。 例如肾上腺素经与甲醛缩合而得到强荧光产物，然后采用荧光显微法可以检测组织切片中含量低至 10?17g的肾上腺素。 8.5 荧光法的特点 灵敏度高：荧光分析法的灵敏度比吸光分析法高2~4个数量级，检测下限在0.1~0.001μg/mL。原因：一是荧光信号噪声小，较微弱的信号也能被检测，且可以高倍放大；二是荧光强度和激发光强度成正比关系，可提高激发光的光强以增大荧光强度。 选择性好：荧光分析法的光谱比较简单，特征性强，而且有激发光谱和发射光谱可供比较。 荧光法提供比较多的物理参数：包括激发光谱、发射光谱和三维光谱以及荧光强度、荧光效率、荧光寿命等多种物理参数。这些参数反映了分子的各种特性，能从不同角度提供研究对象的分子的信息。 关于三维荧光光谱技术： 荧光是激发波长和发射波长两者的函数，一个化合物的荧光信息完整的描述需要三维光谱才能实现。三维荧光法是近20多年发展起来的一门新的荧光分析技术。这种技术能够获得激发波长与发射波长或其它变量（如波长和时间）同时变化时的荧光强度信息。 通常，三维荧光的三个维度是指荧光激发、发射波长和荧光强度，它表现的是荧光强度随激发和发射波长同时变化的信息。 ?荧光分析法的缺点： 应用不如紫外可见光谱法广泛，这是因为本身能发射荧光的物质相对较少；用加入某种试剂使非荧光物质转化为荧光物质来进行分析，其数量也有限。 荧光 磷光 三重态 单重态 失活 振动弛豫 系间窜越 内转换 外转换 荧光量子产率 荧光强度与浓度的关系、 荧光强度与结构的关系 激发光谱和荧光光谱及其特征 作业： P203 2 4 6 第八章 分子荧光光谱法Molecular fluorescence spectroscopy 荧光属于光致发光。 光致发光是物质被电磁辐射激发后再发射出波长相同或较长的辐射的现象。 基于化合物的荧光测量而建立起来的分析方法称为荧光光谱法。 8.1 荧光光谱法基本原理 1. 分子的多重态 — 分子的电子状态 单重态 分子内部所有电子自旋都配对的电子状态。 基态单重态：大多数有机物分子的基态都是单重态； 激发单重态：当基态分子一对电子中的一个被激发到较高能级，其自旋方向不会立刻改变，分子仍处于单重态，称为激发单重态。 三重态 有两个电子的自旋不配对而平行的状态。 基态单重态 激发单重态 激发三重态 激发三重态能量比激发单重态低。 2. 激发态分子的失活: 激发态分子不稳定，以辐射或无辐射的方式回到基态。 无辐射跃迁 振动弛豫 激发态分子由同一电子能级中的较高振动能级转至较低振动能级的过程，其效率较高。振动弛豫过程的时间为10-12 s数量级。 内转换 相同多重态的两个电子能级间，电子由高能级回到低能级的分子内过程（S2? S1）。 当两电子能级非常接近以至振动能级有重叠时，内转换容易发生。 系间窜越 激发态分子的电子自旋发生倒转而使分子的多重态发生变化的过程（S1? T1） 。如果一个单重态与三重态的振动能级重叠，发生系(统)间窜越的概率增加。 外转换 激发态分子与溶剂或其他溶质相互作用，发生能量转换的过程。 辐射跃迁 ●荧光 受光激发的分子从第一激发单重态的最低振动能级回到基态的各振动能级时所发出的辐射(S1→S0)。 所以，荧光波长一般比激发光波长长。 荧光分子的寿命（?）： 表示分子停留在激发态上的平均时间。 荧光寿命越短，与其它失活过程竞争的能力越强，越容易发荧光。 ?与?max有如下关系： ?≈10?5/ ?max 对于?→?*跃迁， ?max一般为103 ~ 105 ，所以荧光寿命一般在10?8 ~10?11 s数量级。 ●磷光 从第一激