(精选)【医学课件课件】抗原与抗体的相互作用及免疫学检测教学课件.pptVIP

* 第七章 抗原与抗体的相互作用及免疫学检测 体液免疫的基础是抗原和抗体分子的结合，这种结合可以是游离形式的，也可以结合在细胞表面。 通过抗原抗体的结合继发出各种生理效应，如：溶细胞效应、促吞噬作用、凝集作用、沉淀作用、调节作用等，形成一整套机体体液免疫功能。 抗原决定簇与抗体结合部位的结合，要求分子结构有互补性，也因此具有高度的特异性。 第一节 抗原与抗体反应的特点 一、特异性 抗原与抗体相互结合只局限于一些大分子表面的特定部位，即抗原决定簇和抗体结合位点之间，且以亲和力的作用方式结合在一起。抗原抗体的结合并没有共价键形成，而是由这些特定部位之间的短程分子力相互作用的结果。这些吸引力只有在极短的距离内才有效。因此抗原决定簇与抗体结合位点在空间上必须处于紧密接触状态，才能产生足够的结合力。这种分子间的互补结构决定了抗原抗体结合的专一性。 抗原抗体分子间的作用力，即亲和力包括以下几种： 1、盐键（离子键） 2、范德华力 3、疏水作用 4、氢键 二、抗原与抗体结合的可逆性 抗原抗体的结合反应是一个可逆的反应 Ab+Ag Ab:Ag 由于抗原抗体结合的可逆性，可利用亲和层析法分离纯化抗原或抗体；利用待测抗原和标准抗原与抗体的竞争结合，进行抗原或抗体的定量测定，如放免检测法、酶联免疫吸附法等 三、抗原与抗体反应中量的关系 当抗体与抗原结合时，如果是颗粒抗原，则出现凝集现象；如果是可溶性抗原，则产生沉淀作用。这些可见现象的出现是以抗原与抗体反应特异性和亲和力为基础的，同时也是抗原抗体反应的继发过程。 当抗原与同型抗体相遇时，在合适条件下，不论彼此量的多少，都立即发生特异性的结合形成抗原抗体复合物，这一过程通常只需要几秒的时间便可完成，称为反应的一级阶段。 在一级阶段之后，继发出现抗原与抗体间进一步交联而形成网络状凝集物，进而出现可见的凝集和沉淀，称为反应的二级阶段。这一阶段是抗原抗体网格生长的阶段，速率要慢的多，且在很大程度上依赖于温度、离子强度等外界条件，但更重要的是需要合适的抗原抗体分子比例。只有当二者的结合价彼此饱和时，才能连接成一个大网格样凝集物，出现凝集或沉淀。 佐剂在抗血清制备中的作用： 由于佐剂有吸附和包埋抗原的“储藏所”作用，延长了抗原在体内的存留时间，便于抗原较长时间的、不间断的刺激机体免疫系统，使初次反应与再次反应结合在一起，其免疫效果更为理想。另外，在佐剂中含有激活巨噬细胞等生理功能的卡介苗类物质，可提高抗原的免疫原性，因此要获得高效价的抗血清，常使用各种类型的佐剂。 动物个体的不同组织部位对抗原刺激的敏感性也是不同的。淋巴结、脾脏、足掌、眼睑结膜等是反应敏感部位，也是免疫动物的常用部位。 一、动物的免疫 1、抗原用量：0.5mg/kg 2、佐剂：弗氏佐剂 弗氏佐剂的成分和使用 3、免疫方法：淋巴结注射、腹部皮下注射、四足掌皮内注射。 4、免疫次数：每隔7-10天免疫一次，共需3-4次。第二次免疫后开始测效价。 二、抗血清制备和抗体效价测定 1、采血方法：兔颈动脉放血、兔心脏取血、兔耳缘静脉放血、鼠心脏取血、剪尾采血、眼窝采血。 2、抗血清制备：血液室温放置1-2h或冰箱内4度过夜，血清便可充分析出，用滴管吸出或离心分离取得。分离好的血清加入0.02%叠氮化钠，在4度冰箱内保存可长达半年。 3、效价测定：用免疫动物时的抗原浓度作抗体效价测定的抗原浓度。以出现沉淀反应的抗血清的最大稀释倍数来表示抗血清的效价。 三、免疫球蛋白的纯化 由于抗原抗体的结合具有高度的特异性，在免疫检测中常常直接运用抗血清进行，而无需对抗体进行纯化。 随着免疫检测技术的发展，如用铁蛋白、胶体金等标记抗体作免疫电镜观测，用荧光素、酶、同位素标记抗体作组织细胞染色，或对抗原进行定量测定，就必须对抗体进行纯化，但这类的纯化多数是类别的纯化。 抗体纯化的方法： 1、硫铵盐析法：简便、蛋白质变性较少，33%饱和度的硫铵可以沉淀所有各类免疫球蛋白；缺点是分离的纯度较差，对IgA类抗体来说，浓盐可使其形成二聚体，不宜采用。 2、Cohn冷酒精沉淀法： IgA相对分子量160000，IgM相对分子量1000000，故可通过分子筛将两者分开而得到纯品。 3、硫铵盐析和DEAE-纤维素柱层析法纯化IgG 在pH7.5的溶液中IgG带正电，其他血清蛋白带负电，因此阴离子交换剂DEAE-纤维素可以一次将IgG提纯到很高的纯度 4、IgM的纯化方法：18%饱和度硫铵沉淀+DEAE-纤维素柱层析法。 第三节 抗