HPLC(实训).ppt

目录 HPLC 基本理论 溶剂传输系统 (泵) 进样器 色谱柱 检测器 流动相 色谱方法的发展历程 HPLC 系统的配置 溶剂传输系统 (泵) 泵 将溶剂（流动相）从溶剂瓶传送到进样器 泵 - 流速和压力的稳定性 - 操作方便, 可用于多种不同的溶剂  - 防止脉冲的系统 - 可用于等梯度模式和梯度模式 - 持久耐用 泵操作模式 等梯度模式 - 分析过程中，溶剂组分保持不变 梯度模式 - 分析过程中，按时间改变溶剂组分 - 单泵 : 低压梯度模式 - 并联泵 : 高压梯度模式 等梯度模式 梯度模式 按时间改变溶剂组分 单泵 : 氦脱气和真空脱气 2) 并联泵 操作泵的注意点 1. 必须对溶剂进行脱气 2. 勿空转 3. 使用缓冲溶液之后一定要用水清洗 4. 检查溶剂间的可混合性 5. 启动泵之前要灌泵 6. 控制脉冲 7. 检查泵压 进样阀 进样阀 流动相中加载样品，使流动相把样品带入色谱柱 进样阀 - Rheodyne 进样阀 (手动进样阀) - 自动进样器 使用进样阀的注意点 1. 使用进样针前要清洗干净，并去除气泡 2. 清洗进样针 : 选择样品易于溶解的溶剂 3. 附加清洗方法 :  使用过的溶剂 → 丙酮 →二氯甲烷 4. 使用自动进样器针管清洗溶液时要格外注意 5. 连接管线越短越好 (进样阀和色谱柱, 色谱柱和检测器) Rheodyne 进样阀 1. 定量环进样阀 → 进样量由定量环体积决定 2. 需要定期清洗定量环 进样方式 1. 全充满 - 进样量是固定时 - 进样体积 : 定量环体积的三倍以上 - 正确性 : 0.1% 2. 部分充满 - 进样量是可改变时 - 进样体积 : 小于定量环体积的一半 - 正确性: 1% (取决于进样技术) 自动进样器类型 Spark-Holland 自动进样器 色谱柱 什么是色谱柱 ? 色谱柱把混合物分离成各个单个成分 色谱柱的选择 - 填料 - 粒径 - 硅胶形状 - 孔径 填料性质 色谱柱 材料 - Steel 色谱柱 - PEEK 色谱柱 分离原理 - 正相色谱柱 - 反相色谱柱 - 离子交换色谱柱 - 体积排阻色谱柱 色谱柱材料 Steel 色谱柱 : 钢卡套柱 → 柱接头 PEEK色谱柱 Radial-Pak 色谱柱 分离方法 色谱柱的清洗 检测器 检测器 光学检测器 1. 紫外/可见光检测器 2. 荧光检测器 3. 示差检测器 4. 蒸发光散射检测器（ELSD） 电化学检测器 1. 电导检测器 2. 电化学检测器 紫外/可见光吸收检测器 光源中的特殊波长通过流动池，一部分被吸收、另一部分通过样品。 特定样品对特定波长的吸光度高。 被吸收的光能比例于样品浓度 A = εbc ( Lambert- Beer’s Law ) A : 吸光度 ? : 摩尔吸光系数 b : 光程长 C : 样品的浓度 利用PDA检测器的药物分析 荧光检测器的光路图 用FLD分析PAH 示差折光检测器 原理 - 测定根据样品浓度变化而改变的折射率之差 - 流动池 : 样品池、参品池- 参品池是以流动相填满 分析期间流动相只流过样品池 应用范围 - 聚合物, 糖  - 用于分析以紫外检测器和荧光检测器无法检测的样品 溶剂 溶剂的条件 流动相的混合 使用缓冲液 1) 离子化合物 : 抑制离子 2) 生理学样品 : 调节PH 3) 分离成离子时 : 调节离子浓度 光源 反射镜子 激发光滤光片 激发光裂缝 调焦镜 电子束分裂器 光电 二极管 流动池 收集镜 镜子 发射光裂缝 发射光滤光片 光电倍增管 组分 1 萘 2 anthraquinon 蒽醌 3 acenaphthylene 4 acenaphthene 5 fluorene 6 phenanthrene 7 anthracene 8 fluoranthene 9 pyr