(精选)【医学英文课件】 聚合酶链式反应 Polymerase chain reaction (PCR)教学课件.pptVIP

Characteristics of Taq Polymerase dNTPs dNTP的质量与浓度和PCR扩增效率有密切关系。dNTP溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1M NaOH或1M Tris-HCl的缓冲液将其pH调节到7.0～7.5，小量分装， -20℃冰冻保存。 多次冻融会使dNTP降解。 在PCR反应中，dNTP应为50～200umol/L，尤其是注意4种dNTP的浓度要相等( 等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。浓度过低又会降低PCR产物的产量。dNTP能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。 模 板 模板（靶基因）核酸——模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。 蛋白质污染 有机试剂污染 Mg2+浓度 Mg2+对PCR扩增的特异性和产量有显著的影响，在一般的PCR反应中，各种dNTP浓度为200mmol/L时，Mg2+浓度为1.5～2.0mmol/L为宜。 Mg2+浓度过高，反应特异性降低，出现非特异扩增， Mg2+浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性，使反应产物减少。 PCR条件优化 dNTPs浓度 Mg2+浓度 pH值 Taq用量 循环中每一步时间，循环数 退火温度 加入一些辅助物: PEG、BSA、甲酰胺 引物设