微生物生长课件.pptVIP

第一节 微生物的生长 一、微生物生长与繁殖的概念 生长——微生物细胞吸收营养物质，进行新陈代谢，当同化作用异化作用时，生命个体的重量和体积不断增大的过程。 繁殖——生命个体生长到一定阶段，通过特定方式产生新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。 发育——从生长到繁殖，是生物的构造和机能从简单到复杂、从量变到质变的发展变化过程，这一过程称为发育。 个体生长——微生物细胞个体吸收营养物质，进行新陈代谢，原生质与细胞组分的增加为个体生长。 群体生长——群体中个体数目的增加。可以用重量、体积、密度或浓度来衡量。（由于微生物的个体极小，所以常用群体生长来反映个体生长的状况） 个体生长?个体繁殖? 群体生长 群体生长 = 个体生长 + 个体繁殖 第二节 微生物生长的测定 描述不同种类、不同生长状态的微生物生长情况，需选用不同的测定指标。 （一）微生物生长量和生理指标测定法 直接法 (测体积法，干重法) 间接法（比浊法，碳、氮含量法，其它生理指标） （二）微生物细胞数目的检测法 直接法（血球计数板法） 间接法（活菌计数法、液体稀释法、膜过滤法） 将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来,然后烘干(干燥温度可采用105℃、100℃或80℃)、称重。一般干重为湿重的10-20%，而一个细菌细胞一般重约10-12-10-13g。 该法适合菌浓度较高的样品。 2.比浊法 原理是在一定范围内，菌悬液中的细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌数越多，光密度越大。因此，借助于分光光度计，在一定波长下（450～650nm）测定菌悬液的光密度，就可反应出菌液的浓度。 特点：快速、简便；但易受干扰。 最常用的活菌计数法 取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基在其凝固前均匀混合，或涂布于已凝固的固体培养基平板上。在最适条件下培养后，从平板上（内）出现的菌落数乘上菌液的稀释度，即可计算出原菌液的含菌数。在一个9cm直径的培养皿平板上，一般以出现50～500个菌落数为宜数。 ★技术要求：样品充分混匀，操作熟练快速（15~20min完成操作），严格无菌操作； ★注意事项：每一支吸管只能用于一个稀释度，样品混匀处理，倾注平板时的培养基温度； ★适用范围：中温、好氧和兼性厌氧、能在营养琼脂上生长的微生物， ★误差：多次稀释造成的误差是主要来源，其次还有由于样品内菌体分布不均匀、以及不当操作。 又称血球计数板法 取一滴适度稀释的样品，滴于计数板的计数室内，盖上盖玻片后置于显微镜下直接观察计数。 原理：将1cm2×0.1mm的薄层空间划分为400小格，从中均匀分布地选取80或100小格，计数其中的细胞数目，换算成单位体积中的细胞数。 适用范围：个体较大细胞或颗粒，如血球、酵母菌等。不适用于细菌等个体较小的细胞，因为（1）细菌细胞太小，不易沉降；（2）在油镜下看不清网格线，超出油镜工作距离。 特点：简便、直接、快速、准确，对酵母菌可同时测定出芽率，或在菌悬液中加入少量美蓝可以区分死活细胞。 作业 1.什么是生长？个体生长和群体生长有什么关系？ 2.测定微生物生长的方法有哪几种？并简述平板菌落计数法。 第三节 微生物群体的生长规律 一、微生物的个体生长和同步生长 由于微生物细胞极其微小，研究其个体生长存在着技术上的困难。 同步生长的概念：一个细胞群体中各个细胞都在同一时间进行分裂的状态，称为同步生长，进行同步分裂的细胞称为同步细胞。 同步细胞群体在任何一时刻都处在细胞周期的同一相，彼此间形态、生化特征都很一致，因而是细胞学、生理学和生物化学等研究的良好材料。 把一定微生物接种到一定的液体培养基中后，在一定条件下培养，定时取样测量活菌数，以活菌数的对数值为纵坐标，以培养时间为横坐标，就可以画出一条有规律的曲线，即微生物的典型生长曲线。 一、适应期(又称延滞期、迟缓期、调整期) 1.现象：活菌数没增加，曲线平行于横轴。 2.该时期的特点： （1）生长繁殖的速度几乎等于零 （2）细胞形态增大，杆菌的长度增加。 （3）细胞内核酸含量增加，原生质呈嗜碱性。 （4）合成代谢活跃，核糖体、酶类合成加快，易产生诱导酶。 （5）对外界不良条件，如温度和抗生素等反应敏感。 3.原因：适应新的环境条件，合成新的酶，积累必要的中间产物。 4.影响适应期长短的因素：菌种的种类、菌龄，接种量，培养基成分。 其他名称：指数期 现象：细胞数目以几何级数增加，其对数与时间呈直线关系。 特点： （1）生长繁殖速度快，活菌的数目呈对数增长，世代时间最短，且在这个时期内均匀一致。 （2）细胞进行平衡生长，菌体内各种成分最为均匀。 （3）酶系活跃，代谢旺盛。 （4）在此时期内，菌细胞的形态特征均匀一致，最代表种的特征。 （5）微生物的生化特