猪瘟病毒和不同型猪繁殖与呼吸综合征病毒的多重RT-PCR检测方法的建立.pdf

动物医学进展 ，2012，33(9)：915 ProgressinVeterinaryM edicine 猪瘟病毒和不同型猪繁殖与呼吸综合征病毒的 多重 RT-PCR检测方法的建立 莫胜兰，施开创 ，胡 杰，邹联斌 ，陆文俊 ，李 军 (广西动物疫病预防控制 中心，广西南宁 530001) 摘 要：为建立能 同时检测猪瘟病毒 (CSFV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)的方法，针对 CSFV 和 PRRSV 的基因序列设计 3对特异性 引物 ，第 1对引物扩增 CSFV毒株 NS2基 因508bp片段 ，第2对引 物扩增 PRRSV 美洲型经典毒株和变异毒株 Nsp2基 因338bp／248bp片段 ，第 3对 引物扩增 PRRSV 欧洲 型毒株 ORF5基 因614bp片段 。经过反应条件的优化 ，建立了能同时检测并区分 CSFV毒株和 PRRSV美 洲型经典毒株、变异毒株及欧洲型毒株的多重 RT—PCR方法。该方法可以特异扩增 CSFV和 PRRSV，而与 猪 口蹄疫病毒 (FMDV)、猪伪狂犬病病毒 (PRV)、猪细小病毒 (PPV)、猪 圆环病毒 2型 (PCV一2)均无交叉反 应 ；对 CSFV 和PRRSV 4种重组质粒标准品的检 出下限均为 1．67×10。拷 贝／#L。对采集的 106份临床疑 似病料进行检 测 ，结果 CSFV 和 PRRSV 变异株 混合 阳性 4份 ，占3．77A0(4／106)；CSFV 阳性 7份 ，占 6．60 (7／106)；PRRSV变异株 阳性 17份 ，占16．04 (17／106)。结果表 明，建立的多重 RT—PCR检测方 法可以用于CSFV和 PRRSV的临床快速鉴别诊断和流行病学调查。 关键词 ：猪瘟病毒；猪繁殖与呼吸综合征病毒 ；美洲型毒株；欧洲型毒株；多重反转录一聚合酶链反应 中图分类号 ：$85，4．44 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—5038(2012)09—0009—07 猪繁殖与呼吸综合征病毒 (Porcinereproduc— riveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)可以 收稿 日期 ：2012—03—12 基金项 目：广西科学基金项 目(桂科青 0832057) 作者简介：莫胜兰(1977 )，女，广西平南人，兽医师，硕士，主要从事动物疫病诊断与防控技术研究。*通讯作者 柴米豢米米米豢潦豢豢崇桊米半豢米祟 米采 米 米 米米果杂来柒米豢崇豢豢染 (6)：89． 白P5基 因的克隆及蛋 白结构预测 [J]．中国兽 医学报，2Ol0 r6] MeikeS，NinaB．Identificationofnovelpotentialvirulence—as— (2)：2O6-2l0． sociatedfactorsinHaemophilusparasuis[J]．VetMicrobiol， -I9] 王 艳 ，夏万 田，姜 平 ，等．副猪嗜血杆菌间接 El，ISA抗体检 2O09，136：382-386． 测方法 的建立 [J]．畜牧与兽医，2006，38(3)：5-6． [7] 高 崧 ，刘秀梵 ，张如宽．一种快速提取禽源性大肠埃希 氏菌 [10] 夏金兰 ，欧阳叙东 ，张成桂 ，等．大肠杆菌外膜蛋 白的分离及 外膜蛋 白的方法[J]．微生物学通报 ，1996，23(2)：122—124． 其双向电泳图谱的建立[J]．现代生物医学进展，2009，9(2)： [8] 陈善真，王贵平 ，李春玲，等．副猪嗜血杆菌广东分离株外膜蛋 201_2】5 Optim izationofIndirectELISA Using H CmOphilusParasuis0MP P5f0rAntibodyDetection ZANG Ying—an ，HUANG Cai—mei，LIW an—yan ，LIM iao ·。，SONG