(精选)细胞周期的调控(cell cyclins)教学课件.pptVIP

CELL CYCLE;一、MPF的发现及其作用;染色体超前凝集（PCC）; 人们猜测，在M期的细胞中存在着某种物质，它能够促进染色体的凝聚和细胞的分裂。后来，人们在不同类型的M期细胞中分别提取出了能够促进细胞分裂的的因子，统称为成熟促进因子(maturation promoting factor，MPF)。 ;处于第六期的爪蟾卵母细胞（RD前期I），具GV。;注射实验表明：孕酮诱导卵母细胞成熟；成熟卵细胞质中，含有卵母细胞成熟的因子，称做MPF。;二、p34cdc2激酶的发现及其与MPF的关系 1960s Leland?Hartwell 芽殖酵母 1970s Paul Nurse 裂殖酵母 利用温度敏感突变株，发现许多与细胞分裂有关的基因(cell division cycle gene, CDC)。如;Fission yeast （裂殖酵母）;1988年M. J. Lohka 纯化了爪蟾的MPF，经鉴定由32KD和45KD两种蛋白组成，二者结合可使多种蛋白质磷酸化。;MPF的生化成分：含有两个亚单位 MPF =Cdc2+cyclin （催化亚单位+调节亚单位）;后来Paul Nurse（1990）进一步的实验证明P32实际上是Cdc2的同源物，而P45是cyclinB的同源物，从而将细胞周期三个领域的研究联系在一起。 即MPF是由cyclin和CDC基因编码的依赖于cyclin的蛋白激酶(cyclin-dependent kinase，CDK)，;Leland H. Hartwell ;三、细胞周期蛋白cyclin;Destruction Box in Cyclins;不同类型的CDK/cyclin复合体; ◆活化 ·随Cyclin浓度变化而变化 ·激酶与磷酸酶的调节， 活化的MPF可使更多的MPF活化 ◆功能：启动细胞从G2期进入M期的相关事件;;CDK1的调节与活化; CAK=CDK1-Activiting Kinase;;;Cdc2与细胞周期蛋白结合才具有激酶的活性，故名细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase，CDK)。 Cdc2又被称为CDK1，可将特定蛋白磷酸化，促进细胞周期运行，又称作细胞周期引擎。 如将核纤层蛋白磷酸化导致核纤层解体、核膜消失； 将H1磷酸化导致染色体的凝缩等。 在动物中已知7种CDK。均含有一段相似的激酶结构域，这一区域有一段保守序列，即PSTAIRE，与周期蛋白的结合有关。;控制细胞周期的蛋白质;CDK抑制因子（CDK?inhibitor，CKI） 细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子对细胞周期起负调控作用，目前发现的CKI分为两大家族： ①Ink4(Inhibitor of cdk 4)，如P16ink4a、P15ink4b、P18ink4c、P19ink4d，特异性抑制cdk4·cyclin D1、cdk6·cyclin D1复合物。 ②Kip(Kinase inhibition protein)：包括P21cip1 (cyclin inhibition protein 1)、P27kip1(kinase inhibition protein 1)、P57kip2等，能抑制大多数CDK的激酶活性，P21cip1还能与DNA聚合酶δ的辅助因子PCNA（proliferating cell nuclear antigen）结合，直接抑制DNA的合成;五、细胞周期运转调控制;G1期，在生长因子的刺激下，cyclin D表达，并与CDK4、CDK6结合，使下游的蛋白质如Rb磷酸化，Rb释放出转录因子E2F，促进许多基因的转录，如编码cyclinE、A和CDK1的基因。;;;2、在G1-S期 cyclinE与CDK2结合，促进细胞通过G1/S限制点而进入S期。向细胞内注射Cyclin E的抗体能使细胞停滞于G1期，说明细胞进入S期需要CyclinE的参与。同样将CyclinA的抗体注射到细胞内，发现能抑制细胞的DNA合成，推测CyclinA是DNA复制所必需的 ;3、在G2-M期 cyclinA、cyclinB与CDK1结合，CDK1使底物蛋白磷酸化、如将组蛋白H1磷酸化导致染色体凝缩，核纤层蛋白磷酸化使核膜解体等下游细胞周期事件;cell cycle regulation; 在中期当MPF活性达到最高时，通过一种未知的途径，激活后期蛋白复合体-APC，将遍在蛋白连接在cyclinB上，导致cyclinB被蛋白酶体（proteasome）降解，完成一个细胞周期;分裂期周期蛋白N端有一段序列与其降解有关，称破坏框(destruction box)。 泛素由7