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8 植物遗传转化体系的建立 8.2 植物基因转化的方法 8.2.3 聚乙二醇-介导法（PEG-mediated transformation） （6）用MaCa-2稀释至10mL，离心收集，并用MaCa-2和原生质体培养基各洗一次，最后调整密度至5×104/mL，28℃暗培养。 （7）培养一定时间后分别向培养基中加入一定量的潮霉素进行筛选。 研究结果表明，最适质粒量为25-30g，PEG浓度为15％，pH值8.0。 8 PLANT GENETIC TRANSFORMATION 8 植物遗传转化体系的建立 8.2 植物基因转化的方法 8.2.3 聚乙二醇-介导法（PEG-mediated transformation） PEG法是进行基因直接转移的普遍方法，成本低廉，效果稳定。PEG法转化原生质体的频率虽然较低，但结合PEG融合细胞、高pH值、热激和原生质体同步处理等其他细胞工程技术的综合处理，可提高转化效率。其中的影响因素较多，如植物品种及其原生质体再生系统的效率，外源基因的浓度与构象，携带DNA，PEG溶液，加人PEG和DNA的顺序(先加DNA好)，介质中二价阳离子(Ca2+)的种类和浓度，转化细胞的筛选方法等。 8 PLANT GENETIC TRANSFORMATION 8 植物遗传转化体系的建立