肝炎的分子诊与临床应用.ppt

 肝炎分子诊断项目开展介绍 ---艾迪康市场部 目 录 1、了解肝炎分子诊断 2、分子诊断在HBV中的临床应用 3、分子诊断在HCV中的临床应用 4、ADICON已开展的肝炎分子诊断项目 什么是分子诊断 在临床上应用核酸（DNA/RNA) 和分子生物学技术, 在基因水平诊断和监控疾病情况和疗效，评估疾病的检测方法。 分子技术在乙肝诊断与治疗中应用 高灵敏度乙肝DNA检测 高精度病毒载量检测系统（ COBAS AmpliPrep/Cobas TaqMan ） 高灵敏度乙肝DNA检测优势 定量PCR技术检测患者的血清HBVDNA含量，能更准确地反映病毒复制程度，对HBV相关疾病的诊断、治疗、判断预后意义重大。 QF-PCR是国内常用的定量检测血清HBVDNA水平的方法，COBAS 系统是美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于血清HBVDNA定量检测的方法。它具有灵敏度高，线性范围广，实时监控，重复性好，可检测A、B、C、D、E、F、G、前C区变异等多基因型DNA载量优点。 由于本QF-PCR试剂盒的线性范围为1.0x 103 copies／mL～1.0x 108 copies／mL，对于低于1.0 x 103 copies／mL标本的检测结果不能给出具体拷贝值，有存在漏检的可能。 而COBAS 系统线性范围为20-1.7×108 IU/mL，因此， COBAS 系统更能准确反映血清HBV DNA含量。 COBAS? AmpliPrep/COBAS? TaqMan? HBV Test, v2.0 治疗终点 2009年EASL指南提出的治疗终点： 最理想的治疗终点：持续的HBsAg 消失，伴或不伴抗HBs 抗体出现。 满意的治疗终点：在HBe Ag 阳性患者中，出现持续的HBeAg 血清转换 次级的满意治疗终点：尽可能降低病毒DNA水平（降至实时定量 PCR检测限以下：10-15IU/ml） HBV基因分型 根据HBV全基因核苷酸序列的差异，分为不同基因型:A.B.C.D.E.F.G.H共8个型 不同的基因型具有不同地域分布 我国主要是B\C型为主，偶有A型 北方－C型 HBV基因分型检测临床意义 HBV变异的基础 乙肝病毒:高变异性 1/105 24h 一万亿-十万亿拷贝*变异：一千万—一亿 复制过程:DNA-RNA-DNA HBV逆转录酶:缺乏严格的校正机制 变异:自然变异,免疫压力等等 P区耐药位点检测 HBV病毒耐药性检测 长期使用抗病毒药物可引起HBV耐药，引起耐药的基因突变位点主要集中于P区 原因：抗病毒药物作用在病毒P区药物靶点上，引起相关基因变异，使得药物与相关靶点作用下降，进而产生耐药。 抗病毒治疗后HBV从病毒变异到临床耐药 抗病毒治疗后HBV从病毒变异到临床耐药 病毒耐药的临床影响 耐药病毒的出现使后续治疗的药物疗效降低 耐药病毒的出现抵消了之前获得的临床益处 病毒反弹, 血清转氨酶升高, HBeAg血清转换率降低 肝脏病理进展 肝硬化病人出现肝功能失代偿和死亡 肝移植后肝炎复发率增高 公共卫生危害 耐药病毒株的传播 免疫逃逸 病毒的水平越低，耐药发生的几率越低 初治患者耐药发生率 P区耐药位点检测 长期使用抗病毒药物可引起HBV耐药，引起耐药的基因突变位点主要集中于P区 耐药基因分析在临床药物选择上的应用 目前最常见P区耐药位点11个 （169、173、180、181、184、194、202、204、233、236、250）  拉米夫定 M204I/V L180M V173L 恩曲他滨 V173L L180M M204I/V 阿德福韦 A181V N236T 恩替卡韦 T184A（G/I/S) M250V 特比夫定 M204I/V  抗病毒药物的选择和使用 1.一种药物产生耐药时，需要用具有不同耐药位点药物代替 2.为减少耐药情况，建议从治疗开始就使用具有两种不同耐药位点药物一起治疗 3.由于抗病毒药物的耐药以及治疗的长期性，在治疗过程中应该定期检查，或是在发现药物治疗效果不佳时需排除产生耐 药的可能 药物治疗慢性乙肝患者管理路线图 耐药检测项目 目前检测的变异位点： P区耐药位点11个 （169、173、180、181、184、194、202、204、 233、236、250） 专门检测LAM变异位点：180，181，204，173 专门检测ADV变异位点：181，