细胞培养指南.docVIP

1.1 无菌操作 ① 穿白大褂，戴手套、口罩和帽子，污染时注意及时更换。 ② 离心管、吸管、枪头、EP管和培养容器（瓶、板和皿）等均应高压蒸汽灭菌。 ③ 超净台要用75%的酒精擦拭干净；加样枪、洗耳球和试管架均应用75%的酒精擦拭干净后放入超净台。 ④ 将超净台内的物品摆放整洁后，紫外线照射30min。 ⑤ 相关试剂瓶在放入超净台前，均应用75%酒精擦拭，双手在伸入超净台前也要用酒精擦拭。 ⑥ 超净台内排风扇要开启，酒精灯点燃，所有操作均应在酒精灯前操作，开盖前后瓶口均应过酒精灯，吸管过酒精灯后再放入试剂瓶。 ⑦ 严格禁止袖口在试剂上方擦过，严格避免试剂与废液的污染。 1.2 PBS缓冲液的配制（PH=7.2-7.4） ① 按包装说明，将一袋PBS粉末溶于1L去离子水中，摇匀。 ② 高压蒸汽灭菌后(灭菌后的PBS超过1周后最好重新灭菌)，4℃(室温也可)保存； ③ 标明试剂名称，配制日期，配置人 1.3 0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA溶液的配制 ①称取0.25克胰酶蛋白酶和0.02克EDTA，加入100mlPBS缓冲液； ②搅拌混匀，置于 4℃ 内过夜； ③滤器过滤除菌； ④以10ml分装于15ml无菌离心管中，4℃保存(若长期保存，也可放入-20℃)，用前37℃下回温。 ⑤标明试剂名称，浓度，配制日期，配制人。 本实验室购买的是配制好的0.25%胰蛋白酶+0.02