(精编)DNA合成概述教学课件.pptVIP

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  • 2018-03-21 发布于天津
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DNA合成概述 合成方法 磷酸二酯法 磷酸三酯法 亚磷酸三酯法 亚磷酰胺法 偶联效率高(98%) 合成单体及中间产物稳定 合成原理 CPG 引物的纯化 引物的OD数如何定量? DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后,用水稀释到1ml测OD260值。需要根据稀释倍数换算出母液的OD值。 例如,验证标2OD引物量是否准确,简单的做法是: 加入1ml水,彻底溶解混匀后,取100ul, 加入900ul水,用光径为1cm的石英比色杯,波长260nm, 此时光吸收的读数为0.2。 引物的琼脂糖电泳定量(×) 引物都是单链DNA EB染色原理 如何计算引物的浓度? 粗略计算: nmol数 = OD值 碱基数 × 100 精确计算: nmol数 = (15.2×A数)+(7.2×C数)+(11.5×G数)+(8.3×T数) OD值×1000 1 OD260= 33 ug/ml. 引物的纯度检测 PAGE检测 HPLC检测(主要用于荧光标记引物) 毛细管电泳(CE)检测 质谱(MS)检测 OD260/OD280 从生物体提取核酸时,常用OD260/OD280来评价核酸纯度,这一判断是基于序列中A/G/C/T所占比例大致相等。 A/G/C/T的摩尔消光系数是各不相同的。 碱基组成(20bases) OD260/O

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