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浙江土学学报(农业与生命科学版)
30urnalof
ZhejiattgUniversity(Agric
文章嫡号：1008—9209(2001)05—0531—04
缺失GDD保守区的黄瓜花叶病毒复制酶
基因的克隆及植物表达载体构建
温瑞、，郑重2，周雪乎1
t1浙江大学生物挂术研究所．浙江杭州310020I2浙江大学植物罐护系．浙江杭州310029
摘要：以CMV亚组l椿系Fny—CMVRNA2基因粗为模板．根据其序列设计引物进行PCR扩增．得
到2．5kb的全长复制醇基因扩增产物．对此产物进行纯化，井用NcDl和Bj卢HI进行双酶切，得到3个
片段．将不舍有GDD保守区的2个片段甩T4DNA连接酶连接．井时连接产物进秆PCR扩增得到!
r
kb左右娃失GDD保守压的黄瓜花叶病毒复制醇基因的扩增产物．将其克隆到pGEM下EasyV“{u
上．进行序列刺定．培果表明GDD保守区确已缺失谊缺失不导致开放闲读框架的移码将缺失f，IJf)
保守区的基因定向克隆{q植物表选载体pBIl21中．井经三亲交配导凡根癌农轩菌中，经PCR盟酶切鉴
定，证实质壮已被导^．
关鼍词：黄瓜花叶病毒；夏制酶；植物表连栽体
中田分类号：$432．4+1；Q782文献标识码：A
WENRui‘．ZHENG
Chan92．ZHOUXue—pin91(1．Inst．ofBiotechnology-Zbeflang[r，f{”．[ta“g：fⅢ¨
m“f 310029．China)
310029．Chttm：2．Dept．ofProtection，ZhejiangUniY—Hangzhou
ofGDDdeleted otCucumbermosaicvirusandconstructionofits expression
Cloning replicasegene plant
of Sei、)，2001．27(s)：53t～334
vector．JournalZhejiangUniversity(Agrie．＆Li{e
Abstract：Theentire ofCMV 1 strainwas chairi
replieasegene subgroup Fny amplifiedbypolymerase
reaction(PCR)．PCR of2 5khwere w¨hNcoland ttlrce
product*withlength digested BspH[，and
wereobtained．Thetwo whichdidn’tencodeGDDmotifwel-e and rked
fragments ampli
fragments ligaled
PCRThe 2 2 kbdeletedcfly,e w8sclonedinto Vrctnr{he、t
by resulting rep}i gene p(；L-：M—TEasy
the that of
of confirmedGDD w,35delewd．Thedelet
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