第十二章-核酸的生物合成1.pptVIP

第十二章 核酸的生物合成 遗传信息传递的 中心法则 （一）DNA的半保留复制的概念 DNA的半保留复制实验依据 复制中的大肠杆菌染色体放射自显影图（1963年Cairns实验：阐明了大肠杆菌染色体DNA是一环状分子，并以半保留方式进行复制） 用3H-胸苷标记大肠杆菌DNA，经过近两代的时间，3H-胸苷掺入大肠杆菌DNA 。用溶菌酶把细胞壁消化掉，使完整的大肠杆菌染色体DNA释放出来，放射自显影，得到上图。非复制部分（C）银粒子密度较低，由一股放射性链和一股非放射性链构成。已复制部分占整个染色体的三分之二，其中一条双链（ B ）仅有一股链是标记的，另外一股双链（ A ）的两股链都是标记的，银粒子密度为前二者的两倍。染色体全长约为1100微米。 （二）DNA复制的起点和方式 基因组能进行独立复制的单位称复制子，每个复制子都含有一个复制起点 。 原核生物的染色体和质粒、真核生物的细胞器DNA都是环状双链分子，它们都是单复制子，都在一个固定的起点开始复制，复制方向大多数是双向的，少数是单向复制。多数是对称复制，少数是不对称复制（一条链复制后才进行另一条链的复制）。环状DNA的复制眼象θ，称θ形复制。 DNA的双向和单向复制 （三）原核生物DNA聚合反应有关的酶类 1.DNA聚合酶 1956年Kornberg 等首先从大肠杆菌提取液中发现DNA聚合酶。在有适量DNA和Mg2+存在时，该酶能催化四种脱氧核糖核苷三磷酸合成DNA。dATP、dGTP、dCTP和dTTP四种脱氧核糖核苷三磷酸缺一不可；它们不能被相应的二磷酸或一磷酸化合物取代，也不能被核糖核苷酸取代。DNA的聚合反应表示如下： 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ全酶的结构和功能 DNA聚合酶催化的链延长反应 DNA聚合酶的3′ 5′外切酶水解位点 DNA聚合酶5′ 3′外切酶活力 2.DNA连接酶 DNA ligase first transfers an AMP moiety to the 5` phosphate group (from NAD+ or ATP) before making a phospho－ diester bond. （四）原核细胞DNA的半不连续复制过程 前导链（leading strand） ：当复制叉沿DNA向前移动时，由于两条模板链是反向平行的，而DNA聚合酶只能以5‘→3’的方向合成新链，同时新链必须与模板链反向平行，碱基配对。这样，以走向3‘→5’的亲代链为模板，子代链就能连续合成，称为前导链； 滞后链（lagging strand） ：以走向5‘→3’的亲代链为模板 ，在其上DNA也是以5‘→3’方向合成，因此和复制叉移动的方向正好相反，所以随着复制叉的移动，形成许多不连续的片段，最后连成一条完整的DNA链，该链称为滞后链 。 复制体：在DNA合成的生长点（既复制叉上）分布着许多与复制有关的酶和辅助因子，它们在DNA的模板链形成离散的复合物，彼此配合进行高度精确的复制，称为复制体。复制体沿着复制叉方向前进就合成DNA。 大肠杆菌复制体结构示意图 大肠杆菌复制起点成串排列的重复序列 1. 复制的起始 起始：当DNA的双螺旋解开后，合成RNA引物的过程。引发体：引物合成酶与各种蛋白质因子构成的复合体，负责RNA引物的合成。引发体沿着模板链5’→3’方向移动（与冈崎片段合成的方向正好相反，而与复制叉移动的方向相同），移到一定位置上即可引发RNA引物的合成。 （1）DNA解旋、解链、形成复制叉； （2）RNA引物合成。 2.复制的延伸 （1）子链延长； （2） 半不连续合成。前导链只需要一个RNA引物，后随链的每一个冈崎片段都需要一个RNA引物，链的延长反应由DNA pol.Ⅲ催化。 （3）RNA引物的切除及缺口补齐DNA polⅠ的5‘ → 3’外切活力，切除RNA引物。DNApolⅠ的5‘ → 3’合成活性补齐缺口 （4）DNA切口的连接DNA ligase，动物、真核由ATP供能，原核由NAD供能。3. DNA合成的终止 环状DNA、线性DNA，复制叉相遇即终止。 连接酶连接切口 大肠杆菌染色体复制的终止 （五）复制的忠实性 DNA聚合酶的校对功能 起始时以RNA作为引物的作用 （六）真核细胞DNA复制的特点 1.真核生物的DNA聚合酶 2.端粒酶（telomerase） 端粒合成的一种模型 真核和原核DNA细胞复制比较 二、 DNA的损伤与修复 DNA紫外线损伤的光裂合酶修复 DNA的损伤和切除修复 DNA的重组修复 SOS反应的机制 三、 DNA的突变（自变） 习题（P436） 2.何谓DNA的半保留复制？ 4.比较DNA聚合酶I、II和III性质的异同