rnapreppure多糖多酚植物总rna提取试剂盒操作指南-天根生化.pdfVIP

（DP441）RNAprep Pure 多糖多酚植物总RNA 提取试剂盒操作指南 天根生化科技（北京）有限公司 版本号 实验准备 1. 植物样品（10-20 mg），研钵，液氮 2. 无水乙醇，β-巯基乙醇 3. 一次性无菌注射器（DNase I 配置），移液器及配套RNase-Free无菌枪头（200 μl ， 1ml）1.5 ml，2.0ml 离心管（RNase-free） 4. 通风橱 涡旋振荡器 金属浴台式低温离心机 实验准备-试剂盒准备1 第一次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇， DNase I 储存液的配制 加入量请参见瓶上标签。并在加入无水乙醇后 在瓶身做好标记。 将DNase I 干粉（1500 U）溶解在550 μl RNase-Free ddH O中，轻柔混匀，分装后-20贮存（可保存9个月）。 2 注意：从-20融化后的DNase I储存液保存于4 （可保存6周），不要再次冻存。 实验准备-试剂盒准备2 此步骤建议在通风橱内操作 操作前在SL中加入β-巯基乙醇至终浓 度为5% ，如475 μl SL中加入25 μl β- 巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。 配好的SL 4可放置一个月，裂解液 SL在储存时可能会形成沉淀，如果有 沉淀出现，请加热溶解后使用。 Step 1 50-100 mg植物叶片在液氮 加入500 μl SL，立即涡旋混匀 中迅速研磨成粉末 （已加入β-巯基乙醇） Step 2 12,000 rpm(~13,400×g) 离心2 min Step 3 将上清液转移至过滤柱CS上(过滤柱CS放在收集管中)，12,000 rpm(~13,400×g) 离心2 min ，小心吸取收集管中的上清至新的RNase-Free的离心管中，吸头尽量 避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。 Step 4 12,000 rpm(~13,400×g) ，离心15 -30 sec ，倒掉收集管中的废液， 缓慢加入0.4倍上清体积的 将得到的溶液和沉淀一 将吸附柱CR3放回收集管中。 无水乙醇，颠倒混匀（此时 起转入吸附柱CR3中 可能会出现沉淀）， 注意：如果上清液体积有损失，请相应调整乙醇的加量。 Step 5 向吸附柱CR3中加入350 μl 去蛋白液RW1， 12,000 rpm(~13,400×g)离心30-60 sec ， 弃废液，将吸附柱放回收集管中。 Step 6 DNase I 工作液的配制： 以一个样品为例：取10 μl DNase I 储存液放入新的 RNase-free离心管中，加入70 μl RDD溶液，轻柔混匀 （用移液枪轻柔吹打混匀）。 如同时提取多个样品，建议混合统一配置DNase I 工作 液。如样品较多建议在配置时预留出一定的量，以免因 移液器的误差或枪头吸附造成总量不够的情况。 Step 7 向吸附柱CR3中央加入80