基因工程的工具限制性核酸内切酶的特点及作用.pptVIP

基因工程的工具 南京市燕子矶中学 王明明 基因工程需要哪些特殊工具？ 分子手术刀—— 限制性核酸内切酶 分子针线——DNA连接酶 分子运输车——载体 限制性核酸内切酶的特点及作用 每种限制性核酸内切酶只能识别特定的核苷酸序列，并在特定位点上切割DNA 分子。 在实际操作过程中： 限制性核酸内切酶是如何发挥作用的？ 认一认，画一画： TTCTTGATGGAATCTCGAATTCAGTCTGTCT AAGAACTACCTTAGAGCTTAAGTCAGACAGA ACTTCGATGGATTTAGGGCCCTTCTCCCCA TGAAGCTACCTAAATCCCGGGAAGAGGGGT 在实际操作过程中： 限制性核酸内切酶是如何发挥作用的？ DNA连接酶的特点和作用 将两个相同的黏性末端之间连接起来，即恢复被限制性核酸内切酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。 ——无特异性 ⑴有一或多个限制酶切点 ⑵有一个或多个标记基因， 便于筛选 ⑶导入基因能在受体细胞 中复制、表达 ⑷对受体细胞无害 ⑴有一或多个限制酶切点 ⑵有一个或多个标记基因， 便于筛选 ⑶导入基因能在受体细胞 中复制、表达 ⑷对受体细胞无害 拓展提高—— 筛选含目的基因的重组DNA 在基因工程的实际操作中，科学家选择的载体往往含有两个或更多的标记基因。 如果在目的基因的插入位置有一个标记基因，当目的基因插入后，标记基因将被破坏而无法表达，从而达到筛选目的。 * * 基因工程的概念 实质 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切→拼接→导入→表达 基因重组 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与表达 基因工程一般操作步骤 ——特异性 磷酸二酯键 TGATGGAATCTCG AATTCAGTCT ACTACCTTAGAGCTTAA GTCAGA ACGATGGATTTAGGG CCCTTCTCCCCA TGCTACCTAAATCCC GGGAAGAGGGGT 黏性末端 平末端 思考：1.上面的末端各有几个游离的磷酸基团？ 2.将两个相同的黏性末端再连接起来的是哪种工具在起作用？ 它有什么特点？ 磷酸二酯键 载体的特点和作用 质粒、噬菌体以及一些动植物病毒 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与表达 基因工程一般操作步骤 GATGGAATTCTTTCTTCAGTCGAATTCTGTCT CTACCTTAAGAAAGAAGTCAGCTTAAGACAGA ACTTGGATCCCGATAGAATTCTCCCCAATC TGAACCTAGGGCTATCTTAAGAGGGGTTAG 目的基因甲 载体甲 多个EcoRI组酶切后的载体与目的基因混合之后，加入DNA连接酶，连接产物是否只有一种？ 载体—目的基因（正向） 载体—目的基因（反向） 载体—载体（正、反） 目的基因—目的基因（正、反） 载体自身环化 目的基因自身环化 … … 原因：一种限制酶切割后产生的黏性末端只有一种，相同的黏性末端之间可以任意连接。 基因工程 ? 载体的特点和作用 质粒、噬菌体以及一些动植物病毒 GATGGGATCCTTTCTTCGAATTCAGTCTGTCT CTACCCTAGGAAAGAAGCTTAAGTCAGACAGA ACTTGGATCCCGATAGAATTCTCCCCAATC TGAACCTAGGGCTATCTTAAGAGGGGTTAG 目的基因乙 载体乙 双酶切： 1.保证目的基因的定向插入。 2.提高DNA的重组率。 载体特点中除有多个酶切位点外，还携带标记基因。 ←目的基因 *