长效胰岛素类似物对乳腺癌MCF-7细胞体外作用.DOCVIP

长效胰岛素类似物对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响 汤喻，史祖宣2，付东霞1，王守俊1（1．郑州大学第一附属医院内分泌科，郑州，450052；2.郑州大学第一附属医院肿瘤内科，郑州，450052） 【摘要】 目的 探讨甘精（Insulin Glargine，Glargine）和地特胰岛素（Insulin Detemir，Detemir）对人乳腺癌MCF-7细胞生长的影响及涉及的信号通路。 方法 Glargine、Detemir不同浓度、时间或联合细胞外信号调节蛋白激酶1/2(Extracellular signal-regulated kinase1/2,Erk1/2)、磷脂酞酰肌醇-3-激酶（PhosPhatidylinositol-3-kinase ,PI3K）抑制剂作用细胞，MTT法测细胞数目，Westernblot测Erk1/2和蛋白激酶B(Protein kinase B ,Akt)磷酸化程度,流式细胞仪测细胞周期。 结果 Glargine 1、10、100、1000U/L作用48h或1U/L作用48、72、96h均引起细胞增殖（P值均0.05） Detemir增值作用不明显，两组差异有统计意义。两组Erk1/2、Akt磷酸化程度和S+G2/M期细胞升高，但Detemir组无统计意义，两组差异无统计意义。使用抑制剂后，Glargine增殖作用被抑制（P值均0.05），但Glargine联合PD98059后抑制更明显,S+G2/M期细胞明显减少（P值均0.05）。 结论 Glargine对MCF-7细胞增殖作用明显，呈浓度、时间依赖关系，其中 MAPK和 PI3K/Akt通路均被激活，但MAPK通路更重要。Detemir对MCF-7细胞增殖作用不明显。 【关键词】 甘精胰岛素；地特胰岛素；MCF-7细胞；MAPK通路；PI3K/Akt通路 【中国图书分类法分类号】 R737.9 乳腺癌是女性最常见的肿瘤[1] 。流病学资料显示乳腺癌发病风险在2型糖尿病患者中增高[2,3]，乳腺癌合并2型糖尿病的患者预后较未合并者差[4,5]。2型糖尿病引起的高血糖和高胰岛素血症是其主要机制【6】。高胰岛素血症可使游离的有生物活性的胰岛素样生长因子-1（Insulin-like growth factor -1,IGF-1）增多[7]。胰岛素、IGF-1激活胰岛素受体（Insulin receptor ,IR）、胰岛素样生长因子-1受体（Insulin-like-1 growth factor receptor ,IGF-1R）。IR和IGF-1R有非常相近的信号通路[8]；其下游的丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase ,MAPK），PI3K-Ak和腺苷酸活化蛋白激酶activated protein kinase ,AMPK）三条信号通路共同在高胰岛素血症下的恶性细胞增殖发挥作用[9]。 糖尿病治疗药物胰岛素及类似物具有促进有丝分裂的作用，关于其与肿瘤风险的关系一直都有报道。英国Currie[10]报道在乳腺癌的发病率上，甘精胰岛素和其他胰岛素相比无区别。Dejgaard[11]报道使用地特胰岛素的2型糖尿病乳腺癌风险比使用甘精胰岛素者降低或相当。 本实验通过研究甘精和地特胰岛素对乳腺癌MCF-7细胞的体外作用，比较二者对乳腺癌MCF-7细胞生长的影响及涉及的信号通路 1.1 材料与方法 1．1材料 人乳腺癌MCF-7细胞株购于中科院上海生科院细胞库。gG均购自上海碧云天生物技术有限公司，HRP标记山羊抗小鼠IgG购自北京鼎国公司 1.2 细胞培养 人乳腺癌MCF-7细胞培养于含10%胎牛血清的1640培养基（含双抗），37℃、5% CO2 环境中生长。取进入对数生长期细胞进行实验。 1.3 MTT法测细胞增殖 细胞以3×103个酶仪测量各孔吸光值×104个(lPBS重悬l无水乙醇4℃避光过夜4℃避光30min,流式细胞仪测细胞周期。 1.5 Western blotting测Erk、Akt磷酸化程度 细胞以8×104个10%SDS电泳分离，电转至PVDF膜，封闭2h，一抗4℃摇床孵育过夜，洗膜3次后加二抗孵育1h。洗膜3次后DAB显色。VisionWorkLS软件分析。 1.6 统计学方法　 实验结果用SPSS17.0统计分析软件完成统计分析。文章中均为计量资料，数据用x ±s表示，多组定量资料的比较用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，检验水准α=0.05 2 结果 2.1不同浓度甘精或地特胰岛素对MCF-7细胞生长影响 培养48h后，甘精胰岛素1、10、100、1000U/L均引起细胞增殖（P值0.05），呈浓度依赖关系（P值0.