dnafingerprint多基因座探针-昆明医科大学.pptVIP

许冰莹, Tel:0871Email:bingying_xu@126.com 昆明医科大学法医学院 教学内容和目的要求： ＊ 1.熟悉限制性片段长度多态性分析技术及原理（RFLP）、 DNA指纹的概念、原理、基本技术。 ＊ 2.掌握扩增片段长度多态性分析技术（Amp-FLP）、聚合酶 链反应（PCR）的基本原理、PCR反应体系组成。 ＊ 3.掌握PCR-STR基因分型技术及常染色体STR、Y染色体STR分析。 学时安排：理论课 5学时。 第四章 DNA长度多态性 概述（summary） 一.发展历史 法医DNA分型的研究和应用最初是从DNA长度多态性开 始。 1.1985年Jeffreys,DNA指纹图。 2.80年代，PCR-VNTR分型技术。 2.90年代，PCR-STR分型技术。 ＊三.用于进行DNA长度多态性分析的遗传标记：二类 1.小卫星DNA (minisatellite DNA) 又称可变数目串联重复序列 （Variable number tandem repeats,VNTRs ） 2.微卫星DNA (microsatellite DNA) 又称短串联重复序列 （short tandem repeats,STRs） 第四章 DNA长度多态性(DNA length polymorphism) 第一节 限制性片段长度多态性 （restriction fragment length polymporphism, RFLP） 一.概述（summary） RFLP技术是一种传统的分子生物学检测技术，用于突变分析 、基因诊断等方面。 RFLP反映了个体间DNA核苷酸顺序的差异，并且这种差异是按照孟德尔遗传方式进行遗传。 法医物证学方面：对人类基因组中的VNTR基因座进行分型。 应用限制性内切酶和分子探针的特异性，通过DNA分子杂交技术，获得具有高度个体特异性、有多条条带组成的DNA图谱 ---DNA指纹图。 （三）分子探针 （ Molecular probe ） 1.根据探针的特异性分二类： 单基因座探针---DNA纹印（DNA profile） （single locus probe） 多基因座探针---DNA指纹（DNA fingerprint） （Multiple loci probe ） （三）分子探针（ Molecular probe ） （1）单基因座探针（single locus probe） 纯合子显示一条谱带（两条长度相等的片 段），杂合子显示两条谱带（两条长度不 等的片段）---DNA纹印（DNA profile）。 单基因座探针：Pynh24，pCMM101等 （三）分子探针（ Molecular probe ） 2.探针标记（Probe mark） 在探针上连接标识分子，当探针与靶基 因片段杂交形成双链分子后，通过对标记 分子的检测就可以确定靶基因片段。 三.分子探针（ Molecular probe ） （二）探针标记(Probe mark) 标记物： 32P，生物素，荧光素，酶标记 （辣根 过 氧化酶，碱性磷酸酶）。 二.限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymporphism, RFLP）  限制性片段长度多态性分析有两类： 1.DNA纹印（DNA profile）：单基因座探针，单个VNTR基因座的等位基因，纯合子显示一条谱带，杂合子显示两条谱带。 2. DNA指纹（DNA fingerprint）：多基因座探针，多个VNTR基因座的等位基因，图谱由多条带组成。 （一）基因组DNA的提取、纯化与定量 （Genomic DNA extraction, purification and quantitative） 1.基因组DNA的提取（ Genomic DNA extraction ） DNA提取常用方法(DNA extraction methods) 2.基因组DNA的纯化(Genomic DNA purification ) DNA分析通常需要高纯度的样本DNA。 残留的蛋白质、各类化学物质都可能影响 后续检测过程，降低检测的阳性率。 2.基因组DNA的纯化(Genomic DNA purification ) DNA纯化方法： （1）重复用有机溶剂萃取和乙醇沉淀实验过程 （2）柱层析：Microcon100,Centricon30， Sephadex G50。 不同微孔孔径的滤膜所具有的吸附和过滤作用。 琼脂糖凝胶电泳 DNA分