Optogenetics光基因学fss教学教材.pptx

Optogenetics 光遗传学及光学在其中的应用School of Life Science, PKUOpto: related with opticsGenetic: Expression, regulation of genesPhoto courtesy: Nature ViodeoAndNeurosciencePhoto courtesy: Nature ViodeoSingle-component optogenetics 单组分光遗传学1979，Francis Crick提出： 神经生物学主要挑战——控制脑中一种神经细胞，而使其他细胞保持不变。神经元的激活或者抑制——行为的变化行为的获得或者缺失—— 神经元的变化复杂病理机制的研究——阿兹海默症神经元衰变过程？记忆退化机理？PET scanning .tw/neuroscience/视蛋白(Opsins)的发现1971，Stoeckenius and Oesterhelt发现细菌视紫红质在光激发下有离子泵的作用；1977，Matsuno-Yagi and Mukohata发现盐细菌视紫红质；光照激发----- 离子泵活动---- 动作电位、神经冲动Stoechkenius et al, 1971离子通道与动作电位动作电位与离子通道神经细胞膜电位为负；膜内外离子浓度不同；去极化膜电位上升，超极化膜电位下降；动作电位与离子进出相关光遗传学未应用于神经学外源蛋白质对脆弱的神经元造成伤害；光电流太微弱、速度慢；不满足Single-component strategy视蛋白的作用需要一个共同作用因子 ——all-tans retinal（全反式视黄醛）视蛋白与离子通道Optogenetics: 10 years of microbial opsinsin neuroscience光遗传学领域的研究工作发展153▲ Keyword: bacteriorhodopsin█ Keyword:optogeneticsOptogenetics: 10 years of microbial opsinsin neuroscience光遗传学领域的研究工作发展细菌视紫红质19711盐细菌视紫红质1977,19825视紫红质通道蛋白1984,1991,2002三种重要视蛋白的发现3Optogenetics: 10 years of microbial opsinsin neuroscience光遗传学领域的研究工作发展细菌视紫红质在神经元和线虫行为获得中应用，20051神经元与光纤的接触，光基因学在线虫行为缺失、哺乳动物行为获得中的应用，20075通过轴突投射和重组酶实现的行为控制，闭环光基因学，20093视蛋白Opsin在神经学研究中的应用和设备发展Optogenetics: 10 years of microbial opsinsin neuroscience2010Nature年度技术 2010年Optogenetics被评为Nature年度技术，此后领域内跟进大量研究光学微电子蛋白质工程神经生物学Optogenetics: 10 years of microbial opsinsin neuroscience光遗传学光遗传学的由来与神经生物学研究视蛋白的发现、离子泵作用神经学家渴求的单组分研究工具光遗传学的发展进程光遗传学的具体研究光遗传中光学的作用以及待解决的问题光遗传学光遗传学的由来与神经生物学研究光遗传学的具体研究视蛋白的原理和开发光遗传神经生物学研究过程光遗传中光学的作用以及待解决的问题视蛋白与神经细胞动作电位激活型通道：阳离子自由进出，去极化更容易；抑制型通道：氢离子外流，或氯离子内流，膜电位超极化；激活和抑制叠加Optogenetics: controlling cell function with light, Nat. Method,2011视蛋白离子泵作用原理——结构与功能细菌视紫红质H+泵示意图X射线衍射得到ChR感光部分的结构构象变化特定离子沿梯度进出结构域光谱吸收光照2012 Hideaki Kato et al视蛋白家族——光遗传学神经研究的重要工具 视蛋白的光谱、峰值、半衰期数据方法：位点突变（蛋白质工程），基因组扫描 Inbal Goshen et al, Cell, 2011光遗传学光遗传学的由来与神经生物学研究光遗传学的具体研究视蛋白的原理和开发光遗传神经生物学研究过程光遗传中光学的作用以及待解决的问题Optogenetics: 10 years of microbial opsinsin neurosciencePhoto courtesy, Guoshen, Stanford光遗传学神经研究过程——视蛋白基因转入 通过腺病毒在神经细胞