铁皮石斛组织培养培训材料.ppt

铁皮石斛 组织培养 B1小组准备素材 铁皮石斛的组织培养 铁皮石斛，为兰科多年生附生草本植物。生于海拔达1600米的山地半阴湿的岩石上，喜温暖湿润气候和半阴半阳的环境，不耐寒。一般均能耐－5℃的低温。石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数十种，铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。 铁皮石斛的组织培养技术路线 外植体 丛生芽 培养基 生根发育 完整植株 蔗糖：30g 琼脂：6.8g 初代培养基的设计 MS+BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖3%+琼脂6.8%【pH值5.2~5.6】 MS母液： I-V50ml,5ml,5ml,5ml 5ml。 激素母液：BA10ml,NAA5ml 蔗糖：30g 琼脂：6.8g 土豆汁150ml 继代培养基的设计 MS+BA0.5ml+NAA0.2+土豆汁10%~20% 【pH值5.2~5.6】 取MS母液： IV50ml,5ml,5ml,5ml,5ml; 激素母液：BA5ml,NAA2ml NAA BA IAA 增殖培养将建立的无菌系中的小苗转入增殖培养基中进行增殖培养。增殖培养基以MS为基本培养基，添加不同浓度的生长调节剂BA、NAA、IAA、IBA及土豆汁和香蕉汁等附加物。 土豆汁 香蕉汁 IBA 蔗糖：30g 琼脂：6.8g 香蕉汁：200ml 活性炭：20g 生根培养基的设计 1/2MS+NAA0.2~0.5mg/L+香蕉汁20%+活性炭2.0%【pH值5.2~5.6】 取MS母液： IV25ml,5ml,5ml,5ml,5ml; 激素母液：NAA2~5ml 外植体的处理 Text 1 Text 2 Text 3 摘去叶片和膜质叶鞘，剪成约2cm长带节的小段。 用洗洁剂清洗后置流水下冲20~30 min。 在超净工作台上用75%的酒精消30s0.1%HgCl2灭菌5min后，用无菌水冲洗5~6次，放入垫有干无菌滤纸的培养皿中，以吸去多余水分，茎段两端各切0.2~0.3cm。 接种实验 一、接种准备工作 1、超净工作台开紫外灯照射10-20min送风 2、外植体消毒（继代培养采用已建立的无菌培养物作为材料） 3、工具消毒 二、接种操作 1、用消毒工具、器皿，切取铁皮石斛幼茎段2cm 2、接种环烧红，沾一下培养基 3、镊取茎段插于培养基中 4、封口、标记 各时期的培养条件 茎段的诱导时间在5~11天之间 培养温度23~25℃，光照强度2000lx，光照时间10h/d 参考文献 [1]郑宽瑜,邓君浪,赵培快繁技术体系研究[J].云南农业科技,2009,(S2):57-59。 [2]周根余,谢薇,程磊.影响铁皮石斛原球茎生长的若干因素[J].江西科学,1999,17(4):231-235. [3]叶纪沟.铁皮石斛试管苗的人工栽培研究[J].中国药业,2001,10(1):53。 [4]李铭宗.铁皮石斛的生物学特性和人工栽培[J].福建热作科技,1999,24(1):29-31。 [5]张明,夏鸿西,朱利泉,等.石斛组织培养研究进展[J].中国中药杂志,2000,25(6):323-326。 B1小组成员展示结束