在quantstudio3d数字pcr系统上对illumina文库进行精确定量.pdfVIP

® 应用说明 QuantStudio 3D 数字 PCR 系统 ® 在 QuantStudio 3D 数字 PCR 系统上 ® 对 Illumina 文库进行精确定量 ® 简介 QuantStudio 3D 数字 PCR 芯片包含 20,000 个独立的 ® ® ® Illumina MiSeq 、HiSeq 和 NextSeq™ 500 平台利用 PCR 反应孔，将标准 PCR 反应分成成百上千个单个 PCR 文库克隆的无序固相扩增生成克隆序列簇 (桥式 PCR)， 反应。对于诸如典型的 NGS 文库等高浓度样本，事先进 然后进行下一代测 (NGS)。上述簇生成步骤是获得最 行样本稀释有助于确保其中一部分反应含有目标分子， 佳序列数据质量和产量的关键，其主要取决于文库输入 另一部分则不含有目标分子，分别代表阳性和阴性反应。 量 。 目前的 NGS 文库定量检测方法 ( 即 Fragment 在双槽式 PCR 仪上扩增后，利用阴性反应定量样本中的 ® Analyzer™ 、Bioanalyzer 和分光光度计读数) 均无法专 目标分子数，无需参照标准品或对照品。本应用说明介 门检测出同时整合两种文库接头的片段。这常常会导致 ® 绍了一种简单的采用 QuantStudio 3D 数字 PCR 系统进 文库浓度计算错误，从而降低了系统通量。因此，在簇 ® 行 Illumina NGS 文库定量的工作流程。 生成之前，精准的文库定量方法是使测序通量最大化的 ® 关键。 Illumina NGS 工作流程中的文库定量 高水平的 NGS 工作流程如