[农学]发酵工程第1讲20112.ppt

1.2目的：不死，不衰，不被污染，便于研究交换使用 1.3原理： 挑选优良纯种，最好是休眠体， 创造最有利于休眠的环境条件，创造使微生物代谢不活泼，生长受抑制（休眠）的环境条件，如：干燥，低温，缺氧，缺乏营养，添加保护剂及酸度中和剂等 干燥：硅胶，无水氧化钙，P2O5是良好的干燥剂 低温：生长温度低限约为-30℃，水溶液中酶促反应温度低限-140℃ 一种好的保藏方法首先应能长期保持菌种原有的优良性状不变，同时还需考虑到方法本身的简便和经济，以便生产上能推广使用。 1.4. 菌种保藏的方法 斜面低温保藏法：酵母菌等 石蜡油封保藏法：酵母菌等 砂土管保藏法：放线菌，霉菌，细菌 冷冻干燥法：细菌，放线菌 液氮超低温冻结法：细菌，真菌 1.4.1 定期移植保藏法：措施：低温（4℃） 优点：简便; 缺点：保存期短，传代多，易退化 斜面冰箱保藏法 接种适宜斜面培养基 → 培养 → 4℃保藏 适用：各大类 保藏期：3~6个月 半固体穿刺冰箱保藏法 穿刺接种适宜半固体（0.5--0.7%琼脂）→培养→4℃保藏 适用：细菌，酵母 保藏期：6~12个月 1.4.2液体石蜡法（石蜡油封藏法） 措施：低温，缺氧 方法：斜面或半固体接种 → 培养 → 加高出无菌液(或斜面)培养基1cm的蜡→4~15℃保藏 适用：不能利用石油的各大类微生物 保藏期：1~2年 优点：简便 1.4.3砂土管保藏法 措施：无营养，缺氧，干燥 方法：孢子或芽孢悬液 → 加入无菌砂土管中→ 干燥→ 封口 → 保藏 适用：产孢子（芽孢）微生物 保藏期：1~10年或更长 1.4.4 冻结真空干燥保藏法： 措施：低温、干燥，缺氧，有保护剂 方法：菌种培养 → 用保护剂悬浮 → 加入安醅管中→低温冻结（-25~-40℃）→抽真空（至0.01mmHg） → 真空封口 → 检查真空度 → 保藏 适用：各大类 保藏期：5~15年或更长 1.4.5 液氮超低温保藏法： 措施：低温、有保护剂 -196℃，10%甘油作保护剂，保藏期长。 几种常用菌种保藏方法的比较 方法名称 主要措施 适宜菌种 保藏期 评价 冰箱保藏法 （斜面） 冰箱保藏法 （半固体） 石蜡油封藏法 沙土保藏法 冷冻干燥法 低温 低温 低温、缺氧 干燥、无营养 干燥、无氧、低温、有保护剂 各大类 细菌、酵母菌 各大类 产孢子微生物 各大类 3~6月 6~12月 1~2年 1~10年 5~15年以上 简便 简便 简便 简便有效 简便有效 菌种保藏机构： 中国微生物菌种保藏委员会(CCCCM) 美国的典型菌种保藏中心(ATCC) 英国国家典型菌种保藏所（NCTC） 法国里昂巴斯德研究所（IPL） 2、菌种的退化和复壮 菌种退化及其防治 菌种衰退：菌种经过长期人工培养或保藏，由于自发突变的作用而引起某些优良特性变弱或消失的现象。 2.1菌种退化的表现：生产性状劣化，遗传标记丢失，原有的典型性状变得不典型,具体表现： 菌落及细胞形态的改变； 生长速度缓慢，产孢子越来越小； 代谢产物生产能力下降； 抗不良环境条件（抗噬菌体，抗低温）能力减弱 2.2退化原因 基因自发突变： 诱变后菌株本身不纯，多核细胞中单核突变，单核细胞中单链改变等； 其他原因： 菌种保藏不当 生长条件不满足 回复突变 2.3 退化的防治 从菌种选育方法上考虑 1)进行充分的后培养及分离纯化 2)增加突变位点，减少基因回复突变的几率： 从菌种保藏方式上考虑 1)尽量减少传代次数 2)选择适宜的保藏培养基 从菌种培养适宜条件上考虑 1)抗性菌株在保藏培养基中应添加相应药物，及时淘汰回复突变细胞。 2)基因工程菌添加抗生素于培养基中防止质粒的丢失 从菌种管理的措施上考虑 1）定期对保藏菌种分离纯化，淘汰已退化细胞 2）定期对发酵液进行分离筛选，选取自发性突变的细胞 菌种复壮：使衰退的菌种重新恢复原来的优良特性。 复壮措施： 对已衰退菌种配合一定培养条件进行单细胞分离纯化淘汰衰退的个体。 选择合适的选育、培养条件。 谢 谢！ 2.1.4芽孢杆菌(Bacillus) 枯草芽孢杆菌：发酵产物为淀粉酶、中性蛋白酶。 苏云金芽孢杆菌：可生产生物农药BT(Bacillus thuringiensis ) 梭形芽孢杆菌：可生产丙酮、丁醇 多粘芽孢杆菌：可生产多粘霉素 地衣芽孢杆菌：可生产杆菌肽 2.1.5 棒状杆菌(Corynebacterium) 可发酵生产谷氨酸等氨基酸，如：北京棒状杆菌 2.1.6 假单孢菌(Pseud