[医药]动物病原学实验动药专业.ppt

 动物病原学实验 进入实验室的注意事项 1 穿工作服 2 书本等物品放入抽屉 3 树立无菌概念 4 不能抽烟、吃零食 5 爱护公物，注意节约 实验一　显微镜的构造和使用　　　　　及细菌形态结构的观察 一、目的要求： 1、了解显微镜的简单构造原理 2、学习掌握油镜的使用技术 3、观察细菌的基本形态 二、实验材料：普通光学显微镜 、香柏油、二甲苯、擦镜纸、 标本玻片:大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、枯草杆菌、炭疽杆菌 三、普通光学显微镜的基本结构 四、几种显微镜的简单原理 1、暗视野　　2、相差　　3、荧光　　4、电子 五、油镜的识别及使用和原理 六、使用完毕显微镜及标本片的处理 七、作业： 1、普通显微镜与油镜使用上有何区别？ 2、绘出你所观察到的细菌形态。 普通光学显微镜的简单原理 可见光 紫外光 电子衍射 使用前侧面注视，调节粗焦轮（物镜距玻片5mm）； 双目注视时，反时针调节粗焦轮，可见模糊镜像，顺时针调节细焦轮； 每旋转一周粗焦，镜筒升降10mm，细焦0.002mm，先低倍后高倍； 低倍使用时下降聚光器，高倍使用时上升聚光器。光线充足使用平面镜，光源不足使用凹面镜； 使用高倍前先使用低倍选择目标视野，转移镜头换高倍，重新调节亮度。更换玻片时，重新低倍开始； 使用完毕后，仔细擦拭，一切归位。 四、油镜的识别及使用原理 1 光圈调最大 2 标本上滴加香柏油0.5-1滴 3 转换油镜头浸入油滴中 五、使用完毕显微镜及标本片的处理 油镜用过后，应立即用擦镜纸将镜头和玻片擦拭干净 如油渍已干，须用擦镜纸蘸少许二甲苯溶液拭去油渍，再用干擦镜纸拭净镜头 作业 1。普通显微镜与油镜使用上有何区别？ 2。绘出你所观察到的细菌形态 实验二 细菌抹片的制备方法、染色及显微镜观察 实验二　细菌抹片的制备方法、染色及显微镜观察 ? 一、???????? 目的要求： a)??????? 掌握细菌抹片的制备方法 b)??????? 掌握几种常用的染色方法和技术及无菌操作技术 c)???????? 巩固显微镜的使用，并了解细菌的染色特性、形态 二、???????? 材料：炭疽杆菌、葡萄球菌、大肠杆菌斜面，大肠杆菌肉汤 三、???????? 制片及染色步骤：取干净玻片→抹片→干燥→固定→染色→干燥镜检 四、???????? 常用的几种染色方法 1、??????? 革兰氏染色法 （1）???? 草酸铵结晶紫染液1-2分钟，水洗 （2）???? 革兰氏碘液媒染1-3分钟，水洗 （3）???? 95%酒精脱色30秒-1分钟，水洗 （4）???? 沙黄水溶液复染10-30秒，水洗 （5）???? 吸干，镜检 2、??????? 姬姆萨染色法 （1）???? 甲醇固定3分钟，时间长短均可 （2）???? 姬姆萨液足量30分钟或数小时至24小时，水洗 （3）???? 吸干，镜检 3、??????? 瑞氏染色法 　　抹片干燥无需固定，直接滴加染液1－3分钟，再加等量中性蒸馏水，轻轻混匀，续染15分钟水洗，吸干镜检 4、??????? 美兰染色法：甲醇固定3分钟，　加上足量染液2－3分钟，水洗，吸干镜检 五、作业： 1、 根据实验体会，你认为制备染色标本时应该注意哪些事项？ 2、 在你所做的革兰氏染色片中，大肠杆菌和炭疽杆菌各染成何色？它们是革兰阳性菌还是革兰阴性菌？ 3、 作革兰氏染色时，涂片为什么不能过于浓厚？其染色成败关键一步是什么？ ? 一、目的要求 1。掌握细菌抹片的制备方法 2。掌握几种常用的染色方法和技术及无菌操作技术 3。巩固显微镜的使用，了解细菌的染色特性、形态 二、材料 1、大肠杆菌：斜面、肉汤 金黄色葡萄球菌：斜面 炭疽杆菌：斜面 2、革兰染色液、美兰染色液 3、载玻片、接种棒、酒精灯等 三、制片及染色步骤 取干净玻片-抹片-干燥-固定-染色-干燥镜检 1、玻片的处理：旧玻片有油，用95%酒精擦洗，然后在酒精灯上灼烧 2、细菌抹片的制备：抹片 根据所用材料不同，抹片的方法也有差异。 （1）固体培养物 用经酒精灯火焰烧过的接种环，蘸取生理盐水1-2环于清洁无油脂的载玻片中央，再勾取细菌的固体培养物少许混于生理盐水中，涂抹成直径为1-1.5cm大小的均匀的抹片。 　（2）液体培养物 可直接用灭菌接种环勾取细菌培养物1-2环，涂抹于玻片上即可。但要注意将管底沉淀物摇匀，以免影响涂片效果。 　（3）组织涂片 用灭菌的剪刀、镊子取被检组织一小块，以其断面在玻片上压印或涂抹成适当大小的薄片。如为脓汁、血液、乳汁等可直接涂抹于玻片上。 　（4）无论何种方法切忌涂片太厚，否则不利于染色和观察。 3、固定 　　（1）目的: 　　1)、除去抹