微生物学试验Li-JungYin.PDF

微生物學實驗 Li-Jung Yin 實驗一 ：菌體大小測量與測微尺校正 一、目的：了解如何使用接物或接目測微器，並試著用顯微鏡找出比較微小的菌體。 二、原理： 以固定距離（10μM）的接物測微計為標準、測定在不同放大倍率（1000 倍要滴入洋杉 油）的情況下，兩條接目測微計的格線與兩條接物測微計的格線完全重合時，由兩條接目測 微計的格線間的格數與兩條接物測微計的格線間的格數而算出接目測微計於不同倍率的每格 距離。 ※接目測微計每隔距離（μM ）＝接物測微計格數／接目測微計格數×10μM 三、材料： 1.顯微鏡： a.接目鏡b.接物鏡 2.拭鏡油 3.拭鏡紙 4. 洋杉油 5.蓋玻片 6.載玻片 7.酒精燈 8.無菌水 9.接種環 10.Standard strain(標準菌株) ： 1 ○ Bacillus satilis枯草桿菌：TSB broth 37℃ 2 ○ Sacaromyces cerevislae啤酒酵母菌： YM (Yeast Malt)broth 25℃ 四、方法： 1.裝入接目測微計 2.把接物測微計放置於載物台上 3.調整不同倍率觀測，將重合格線之格數分別記下 4.依照公式計算 5.換菌種載玻片觀察，並測得其大小 實驗二 ：培養基的配製＆滅菌 一、目的：能了解培養基的種類與用途及其配製方法。 二、原理： 培養基即指可使微生物生長的液體、半固體或固體的營養物質。營養內羹 (Nutrient Broth ，簡稱NB) ，適用於細菌液體培養。營養瓊脂(Nutrient Agar ，簡稱NA) ，適用於細菌固 體培養。使用高溫高壓殺菌法使之達到無菌狀況。 三、材料： 1.高壓滅菌釜 2.水浴槽 3.螺旋試管 4.三角瓶 5.蒸餾水 6.培養皿 7.酒精燈 8.75%酒精 9.打火機 10.無菌操作檯 11.試管架 12.量筒 13. NB 14. NA 15. NB+agar 四、方法： 1. Nutrient Broth (NB) ： 1分裝於試管8ml→sterilization suspend 13g in 1000ml distilled water. ○ 2 ○Sterilize by autoclaving at 15 lbs pressure (121℃) for 15 min. 2. Nutrient Agar (NA) ： 1倒皿 20~25ml ○ 2 ○NB+1.5%agar→sterilization→50℃水浴恆溫 →pour plate 3.semisolid agar ： NB+0.75%agar→分裝8ml→sterilization→4℃保存 4. NA slant ： NA agar →分裝8ml→sterilization→傾斜 →凝固→4℃ 5.75% Alcohol soln ＊計算1.5%及 0.75%agar的量 11.5% ○ 400×15/100=6g 2 ○0.75% 400×0.75/100=3g 實驗三 ：微生物的分離與接種 一、目的：了解細菌的平面分離方法與用途，以劃線分離方法得到單一菌落，方便之後做進 一步的鑑定測試。 二、原理： 由細菌培養形態判別細菌，常用的培養方法包括：斜面培養、平板培養、液體培養、穿 刺培養、並以肉眼觀察細菌是否具運動性及解膠能力，並記錄菌株在斜面培養基上生長之情 形。 三、材料： 1.酒精燈 2.75%酒精 3.試管架 4.螺旋試管 5.接種環 6.接種針 7.培養基(NA 、NB) 8 打火機 9.