【优选整合】人教版高中生物 选修1专题2课题2土壤中分解尿素的细菌分离与计数（课件） (共15张PPT).ppt

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 课题背景 1.尿素的利用:尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。只能被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用。 2.细菌利用尿素的原因： CO(NH2)2 + H2O CO2 +2NH3 细菌脲酶 课题目标 1.从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 2.统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 尿素分子的立体结构 一、研究思路 （一）筛选菌株 1.实例：PCR技术：一种在体外将少量DNA大量复制的技术。此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。 提出的问题—如何寻找耐高温的DNA聚合酶？ 解决问题的思路—寻找耐高温环境。 原因：高温条件淘汰了绝大多数微生物。 获得启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 2.实验室微生物的筛选原理 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其他微生物生长。 本课题使用的培养基KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 .7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 能。只有产生脲酶的细菌才能利用尿素作为氮源而生存。 3.选择培养基 问题1：该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 问题2：此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。 加入青霉素的培养基 （1）概念： （2）例子： —细菌不生长，酵母菌、霉菌等真菌能生长。 不加含碳有机物的无碳培养基 —分离自养型微生物。 （二）统计菌落数目 1.显微镜直接计数 (1)原理:利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。 (2)具体做法： （3）优缺点： 缺点：不能区分死菌和活菌。 优点：能准确统计微生物的实际数目。 每一个大方格边长为 1mm ，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3。　 以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，一个大方格中的总菌数是多少? 5A 1ml菌液中的总菌数?(1ml=1cm3=1000mm3） 5AB×104 1mm 2.间接计数（活菌计数法） C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mＬ)，M代表稀释倍数。 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 （2）原理： 稀释涂布平板法。 （1）常用方法： 计算公式： 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 【例1】某同学在稀释倍数为106的培养基上测得平板上的菌落数的平均值为234，那么每毫升样品中菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1 mL）（ ） A.2.34×108　　B.2.34×109 C.234　　D.23.4 （3）计数 【解析】稀释倍数为106，0.1 mL稀释液的菌落数的平均值为234，则每毫升样品中菌落数就为234/0.1×106=2.34×109。 B 【例2】：两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数。从对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。 1、甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230。 2、乙同学在该浓度下涂布了A、B、C三个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果。你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？ 甲：没有重复实验（至少涂布3个平板）。 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值。 1.目的：排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 ㈢设置对照 2.实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。其他同学认为A同学结果有问题，可能是A同学培养基被杂菌污染，或者培养基混入其他含氮物质，导致其他杂菌生长。 但A同学认为自己选用土壤样品不同导致结果不同，但是A同学没有设计对照，拿不出让同学信服的证据。你能通过设置对照，帮助A同学排除上述两个可