离子交换层析讲解资料.pptVIP

六、常见的离子交换层析介质 1、结合基团 1.1阳离子交换介质 阳离子交换剂中的可解离基因是磺酸（-SO3H）、磷酸（-PO3H2）、 羧酸（COOH）和酚羟基（-OH）等酸性基。 某些交换剂在交换时反应如下： 强酸性：R-SO3 -H+ ＋ Na+ R-SO3- Na+H+ 弱酸性：R-COOH＋Na+ R-COONa ＋H+ 国产树脂中强酸1×7（上海树脂＃732）和国外产品Dowex 50、Zerolit 225等都于强酸型离子交换剂。 * 六、常见的离子交换层析介质 1、结合基团 1.2阴离子交换介质 阴离子交换剂中的可解离基因是伯胺、（-NH2）、仲胺（-NHCH3）、叔胺[N-（CH3）2]和季胺（-N(CH3)3）等碱性基团。某些交换反应如下： 强碱性：R-N（CH3）3 H·OH- ＋Cl 弱碱性：R-N（CH3）2 H·OH- ＋Cl R-NHCH3 H·OH- ＋Cl 强碱性＃201号国产树脂和国外Dowex1、Dowex2、ZerolitFF等都属于强碱型阴离子交换剂。 * 六、常见的离子交换层析介质2、骨架 2.1纤维素离子交换剂 阳离子交换剂有羟甲基纤维素（CM-纤维素）， 阴离子交换剂有氯代三乙胺纤维纱（DESE-纤维素）。 * 六、常见的离子交换层析介质2、骨架 2.2交联葡聚糖离子交换剂 是将交换基因连接到交联葡聚糖上制成的一类交换剂，因而既具有离子交换作用，又具有分子筛效应，是一类广泛应用的色谱分离物质。 常用的Sephadex离子交换剂也有阴离子和阳离子交换剂两类。 阴离子交换剂有DEAE-Sephadex A-25，A-50和QAE- Sephadex A25， A50 ；阳离子交换剂有CM-Sephadex C-50，C-50和Sephadex C-25，C-50。 阴离子交换剂用英文字头A，阳离子交换剂的英文字头是C。英文字后面的数字表示Sephadex型号。 * 六、常见的离子交换层析介质2、骨架 2.3琼脂糖离子离交换剂 是将DEAE-或CM-基团附着在Sepharose CL-6B 上形成，DEAE-Sephades（阴离子）和CM-Sepharose（阳离子），具有硬度大， 性质稳定，凝胶后的流速好，分离能力强等优点。 * 四、离子交换剂的选择、处理和保存1.离子交换剂的选择 其次是对离子交换剂基质的选择。 一般纤维素离子交换剂价格较低，但分辨率和稳定性都较低，适于初步分离和大量制备。 葡聚糖离子交换剂的分辨率和价格适中，但受外界影响较大，体积可能随离子强度和pH变化有较大改变，影响分辨率。 琼脂糖离子交换剂机械稳定性较好，分辨率也较高，但价格较贵。 * 四、离子交换剂的选择、处理和保存1.离子交换剂的选择 另外离子交换剂颗粒大小也会影响分离的效果。 离子交换剂颗粒一般呈球形，颗粒的大小通常以目数（mesh）或者颗粒直径（mm）来表示，目数越大表示直径越小。 前面在介绍交换容量时提到了一些关于交换剂颗粒大小、孔隙的选择。另外离子交换层析柱的分辨率和流速也都与所用的离子交换剂颗粒大小有关。 * 四、离子交换剂的选择、处理和保存1.离子交换剂的选择 另外离子交换剂颗粒大小也会影响分离的效果。 一般来说颗粒小，分辨率高，但平衡离子的平衡时间长，流速慢；颗粒大则相反。 所以大颗粒的离子交换剂适合于对分辨率要求不高的大规模制备性分离，而小颗粒的离子交换剂适于需要高分辨率的分析或分离。 * 四、离子交换剂的选择、处理和保存1.离子交换剂的选择 四：常用的层析介质 这里特别要提到的是，离子交换纤维素目前种类很多，其中以DEAE-纤维素（二乙基氨基纤维素）和CM-纤维素（羧甲基纤维素）最常用，它们在生物大分子物质（蛋白质，酶，核酸等）的分离方面显示很大的优越性。 * 四、离子交换剂的选择、处理和保存1.离子交换剂的选择 四：常用的层析介质 一是它具有开放性长链和松散的网状结构，有较大的表面积，大分子可自由通过，使它的实际交换容量要比离子交换树脂大的多； 二是它具有亲水性，对蛋白质等生物大分子物质吸附的不太牢，用较温和的洗脱条件就可达到分离的目的，因此不致引起生物大分子物质的变性和失活。 三是它的回收率高。 所以离子交换纤维素已成为非常重要的一类离子交换剂。 * 四、离子交换剂的选择、处理和保存2.离子交换剂的处理和保存 ①处理： 离子交换剂使用前一般要进行处理。 干粉状的离子交换剂首先要进行膨化，将干粉在水中充分溶胀，以使离子交换剂颗粒的孔隙增大，具有交换活性的电荷基团充分暴露出来。 而后用水悬浮去除杂质和细小颗粒。再用酸碱分别浸泡，每一种试剂处理后要用水洗至中性，再用另一种试剂处理，最后再用水洗至中性，这是为