药理实验设计与临床毒理学方法幻灯片.ppt

长期毒性试验 长期毒性试验的目的是通过重复给药的动物试验表征受试物的毒性作用，预测其可能对人体产生的不良反应，降低临床试验受试者和药品上市后使用人群的用药风险。 ①预测受试物可能引起的临床不良反应，包括不良反应的性质、程度、剂量－反应关系和时间－反应关系、可逆性等； ②判断受试物反复给药的毒性靶器官或靶组织； ③推测临床试验的起始剂量和重复用药的安全剂量范围； ④提示临床试验中需重点监测的指标； ⑤还可以为临床试验中的解毒或解救措施提供参考。 长期毒性试验的最终目的是为临床试验和临床用药服务。 长期毒性试验的基本要求 实验动物 一般要求使用2种动物，即啮齿类和非啮齿类动物 实验条件 创新药物的长期毒性实验应在GLP实验室进行 给药途径和方法 应与推荐的临床给药途径相同 实验期限 为拟临床给药周期的4倍 观察指标 一般观察 血液、尿液检查 脏器指数、器官或组织病理学检查 心电图检查 长期毒性试验剂量设置 低剂量组：高于整体动物最佳有效剂量或预计每天人用量，此剂量不应出现毒性反应； 中剂量组：应使动物产生轻微的或中等程度的毒性反应； 高剂量组：应使动物产生明显的或严重的毒性反应，或个别动物死亡，但死亡数不超过20％； 空白对照组：给予溶媒或赋形剂，若溶媒或赋形剂有毒性时则增加正常对照组； 正常对照组：口服等容量饮水，注射给药则给予等容量生理盐水。 限度实验：若小鼠急性毒性的口服给药剂量大于5g/kg，注射给药剂量大于2g/kg，可考虑只作一个高于临床剂量50倍（犬用30倍）的剂量组。 生殖毒性试验剂量设置 三段生殖试验：一般生殖毒性试验（Ⅰ）、致畸敏感期毒性试验（Ⅱ）和围产期毒性试验（Ⅲ）。 剂量设计 高剂量组：有母体毒性反应，一般为LD50的1/2~1/3，人临床拟用剂量的80~100倍，或为最大给药量； 低剂量组：无母体和胚胎毒性反应剂量，一般为LD50的1/30~1/50，人临床拟用剂量的3~5倍； 中剂量组：一般为高低剂量的平方根； 阴性对照组： 空白对照组： 阳性对照组：必要时设置 药效学试验剂量设置 测出药物或化合物的LD50以后，取其1/10，1/20，1/30的剂量作为药效学的高、中、低剂量。 对于中药和天然药物而言，可能很多时候测不到LD50 ，常常会以MTD的几分之一来定药效学剂量，1/2或1/3是常用的。 根据临床用量计算：凡有长期大量临床用药经验者，可根据人用量的数倍至几十倍用作动物试验剂量； 根据文献估算剂量：文献中相似药物的用量，若处方相似，提取工艺相似，可作为参考，估计出供试药的合理剂量范围； 一般情况下，药效试验的剂量不高于毒理试验剂量。药效学试验的高剂量应低于长期毒性试验的中剂量或低剂量。特殊情况下（如抗癌试验），药效学试验的试验剂量可适当调高，但不应超过长期毒性试验的高剂量。 通过预试验估计剂量：不论以何种方法选择的给药剂量均应通过预试验，进一步确定合理的剂量范围，并按等比级数分为两个以上剂量组。 药物依赖性试验 药物依赖性包括身体依赖性和精神依赖性，前者可出现戒断症状，后者则不出现戒断症状。 小鼠跳跃试验（jumping test） 基本原理：短期内重复给动物大剂量受试药，然后注射阿片受体拮抗剂（纳洛酮），如受试药属于阿片类药物，纳洛酮可促使其发生跳跃反应，观察小鼠跳跃次数可反应该药的依赖性程度。 注意事项 （1）增大受试药物和拮抗剂的剂量可缩短给药时间和减少给药次数，但剂量过高使药物毒性增大，甚至可使动物死亡，最好以镇痛ED50的倍数确定给药的剂量和次数。 （2）纳洛酮的作用时间短，跳跃反应的观察应在注射后30min内进行，一般在前15min内跳跃反应较频繁。 药物依赖性试验 大鼠体重减轻实验（weight loss test） 基本原理：吗啡戒断后体重急剧下降，以戒断后24~36h最为明显，是吗啡身体依赖性的较好指标。 选用雄性大鼠，每天早晚2次定时测定动物体重，按体重给药，连续7周。停药后每隔2h测量体重一次，比较停药后不同时间的动物体重变化。 注意事项 每天定时注射吗啡容易形成身体依赖性，戒断后体重减轻明显。 注意的问题 动物试验数据不能简单地套用到人身上，人的数据同样也不能简单地套到动物的身上的。因为不同的种属存在着较大的差异，但动物的数据可以在一定程度上为临床使用提供参考。这也正是临床前试验和临床试验的意义所在。 等效剂量即产生相同药效的人体剂量，从动物实验数据推算可能产生等价药效的人体