高效液相色谱法测定血清中.pptVIP

高效液相色谱法测定血清中维生素A、E、β-胡萝卜素 南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心 一、原理 二、操作方法 三、数据处理 四、质量控制 在测定中，可用标准血清进行质量控制，保证测定结果的可靠性。 标准血清至少要在测定开始和结束时各测定一次； 当样品较多时，可隔若干个样(如12个)测定一次，最后取标准血清测定的平均值即可。 样品保存时间： 血清样品在本法的制备与贮藏温度下，可保存6个月不发生变化； 维生素A和维生素E的无水乙醇贮备液及应用液贮于冰箱(2~l0℃)，分别可稳定2个星期和1个星期； β-胡萝卜素遇光和氧会被迅速破坏，所以应临用新配，并注意避光保存。样品的提取液比较稳定，可以隔夜后进行分析。 五、思考题 * * * 本实验应用HPLC法测定人血清中维生素A、维生素E及β-胡萝卜素； 血清样品用有机溶剂处理、提取后经HPLC色谱柱分离，根据保留时间和峰面积(或峰高)与标准比较，便可定性和定量。 1．样品处理 血清样品在采血后立即离心，分离血清； 置5ml塑料试管中，充氮、密封，于-40℃保存备用。 在5ml棕色具塞玻璃离心管中，加入0.25ml血清、1ml 10％邻苯三酚乙醇溶液、0.5ml 60％KOH，用氮气将管内空气置换，37℃水浴1h； 冷水浴3min后加入5％NaCl 1ml，己烷/乙酸乙酯(9:1)3ml，用氮气将管内空气置换，盖紧塞子，水平振荡器