微生物遗传学M.G.第六章、1,2节.ppt

第六章、细菌转座子与遗传重组 第一节、细菌转座子的类型 和结构 第二节、细菌转座子的插入 机制和转座模型 第一节 细菌转座子的类型和结构 转座子——可移动的遗传因子（mobile genetic elements） 转座子插入引起极性突变 发现和证明 一、插入序列（insertion sequence, IS ） 1、两端含有反向重复序列（IR） 2、含有转座酶基因，启动子和终止区位于IR中 3、转座时需要靶序列（target sequence），转座后靶序列重复成为DR 4、IS可独立存在，也常常作为其它转座子的一部分 图 10－2 p.244 表 10－1 p.243 二、转座子（transposon, Tn） 1、复合转座子（composite transposon） 结构特点： 两侧为相同或相似的IS, IS可以同向排列或反向排列 IS可以单独转座也可以带动整个Tn转座 P.245 图 10－3 P.245 表 10－2 2、复杂转座子（complex transposon） 也称为TnA类转座子，结构特点： 两侧为重复序列IR或 DR 共同的基因：A, R, 和res 图示：Tn3的结构与功能（Fig.Tn 2） Fig.Tn 2 表 10－3 p.246 三、噬菌体Mu 指一类可以引起突变的溶源性噬菌体，结构复杂，分子量大，插入位点的专一性不高。 一般大小为3－5 x 104 bp。 游离的Mu与插入的Mu在基因顺序上完全相同，证明其整合方式与溶源性噬菌体整合方式不同，更像转座子的转座。 转座是Mu的一种生活方式，其插入基本无靶序列的要求。 四、转座子插入的符号 用“::”表示各类转座子的插入，如： gal T::IS1 , gal E::IS4 , gal OP::IS1 第二节 细菌转座子的插入机制和转座模型 一、插入机制 1．插入步骤 靶序列DNA双链被交错切割 转座因子插入到切口处，两条链的各一端共价相连 靶序列的单链部分通过复制修补上，原来的靶序列转座后变为转座子两侧的正向重复序列，其长度与Tn种类有关，有的4bp有的9bp。 2．插入位点的专一程度 IS4表现绝对专一，要求11－13bp靶序列，Mn只要求2bp,而Tn则在2者之间。 二、转座模型：复制型转座—— Tn3转座模型 转座子DNA双链被切开，切点在每一条链的3’一端。 转座酶交错切割靶序列的每一条单链。 转座子与靶序列的切口相连，产生交叉结构，同时形成假复制叉（pseudo-replication fork）。 DNA链沿假复制叉延伸，合成出2个拷贝的转座子和靶序列。 形成共整合体（cointegrate）,是2个复制子共价连接在一起的特殊结构。 2个拷贝的转座子之间通过解离位点进行的特异重组而分开，完成转座过程。 图9。10 图示Tn3转座机制Fig.7-9 三、转座因子的遗传学效应：引起插入突变 插入结构基因，引起钝化或失活，插入位点出现新基因。如： lac + lac::Tn kmr 表型为 kmr Lac—，增加了卡那霉素抗性基因。 插入的基因被破坏后，有可能出现各种各样的突变体。 插入操纵子的上游基因，带来极性效应 插入位置出现少数核苷酸对的重复、缺失等 不准确的切离带来染色体的畸变。如： hisG::Tn10 Tcr 表型His- Tcr  准确切离 不准确切离 his+ Tcs his - Tcs P.257 fig.10-16 * * *