可见-紫外分光光度法课件.ppt

上页 下页 目录 返回 可见－紫外分光光度法 Vis-UV Spectrophotometry Chapter 11 第一节 物质的吸收光谱 第二节 分光光度法基本原理 第三节 可见分光光度法 第四节 提高测量灵敏度和准 确度的方法 1. 掌握分光光度法基本原理—Lambert-Beer 定律，能熟练运用Lambert-Beer公式进行 有关计算。 2. 掌握吸光度、透光率、吸光系数、摩尔吸 光系数的概念。 3. 熟悉标准曲线法及标准对照法。 4. 了解物质对光的选择性吸收及吸收光谱。 5. 了解分光光度计的基本构造；提高测量灵 敏度和准确度的方法。 本章教学要求 分析方法的分类 按方法的原理：可分为化学分析和仪器分析。 化学分析：凡主要利用化学原理进行分析的方法称为化学分析法； 仪器分析：主要利用物理学原理进行分析的方法则称为仪器分析法。 如：光谱分析法 ，色谱分析法 ，质谱分析（MS）法 ，电化学分析法 ，核磁共振（NMR）分析法等。 光谱分析法：常用的有可见、紫外分光光度法（UV）、红外分光光度法（IR）、荧光光度法、 原子吸收法和X射线原子荧光法等。 UV主要用于药物制剂的含量测定。 激光诱导荧光光谱的灵敏度已达10-22克，达到了检测单个分子的水平，可用于癌症的早期诊断。 分光光度法（吸光光度法）： 根据物质的吸收光谱和光的吸收定律，对物质进行定量、定性分析的一种仪器分析方法。 或者说它是基于被测物质的分子对光具有选择吸收的特性而建立的分析方法。 分光光度法的特点： 灵敏度高------10-5 mol·L-1 ~10 -6 mol·L-1 相对误差小------2%~5% 应用广泛-----医药、卫生、环保、化工等领域。 根据测定时所选用的光源 紫外分光光度法 可见分光光度法 红外分光光度法 第一节 物质的吸收光谱 一. 物质对光的选择性吸收 二. 物质的吸收光谱 υ = c ? 光是以电磁波形式传播的光子流。电磁波能量大小与波长和频率有关。 辐射是量子化的，即不连续地、一份一份地发射或吸收，每一份称一个光子。 光子的能量与辐射频率成正比、与波长成反比： E = hυ = hc ? 一、物质对光的选择性吸收 单色光: 单一波长的光束 复色光: 含有多种波长的光束 电磁波谱: 以波长大小顺序排列的电磁波谱图 波长 10pm 300pm 200nm 400nm 800nm 500mm 1cm 1m 光谱 ?射线 X射线 紫外光 可见光 红外光 微波 无线电波 方法 光谱法 分光光度法 光谱法 核磁共振 可 见 光 380nm 780nm 能 量 E 基态E0 第一激发态E1 第二激发态E2 第三激发态E3 吸收光谱 发射光谱 ? E = hυ 当一束光照射到某物质或某溶液时，该物质的分子、原子或离子与光子作用，光子的能量发生转移，物质中的这些粒子就会发生能级跃迁，从较低能量状态（基态）跃迁到较高能量状态（激发态）：这一过程称为物质对光的吸收。 由于分子、原子或离子的能级是量子化的，不连续的，只有光子的能量(hυ)与被照射物质粒子的基态和激发态能量之差(ΔE)相等时，才能被吸收。 不同的物质，其内部结构不同，基态和激发态 的能量差ΔE不同，选择吸收光子的能量也不同，即吸收的波长(频率)亦不同。亦即不同物质只能选择性地吸收某一波长的光。 光的互补 紫 400 红 660 橙 600 黄 560 绿 530 蓝绿 500 绿蓝 450 蓝 420 光的互补：若两种不同颜色的单色光按一定的强度比例混合得到白光，那么就称这两种单色光为互补色的光。 物质的颜色与光的关系 完全吸收 完全透过 吸收黄色光 光谱示意 表观现象示意 复合光 溶液的颜色：是由于它选择性地吸收了一部分光，而呈现它的补色。 例如：三(邻二氮菲)合铁配合物溶液吸收了 508 nm处