疫苗注册检验及质控方法要点培训资料.pptVIP

1 疫苗注册检验及质控方法要点 李长贵 中国食品药品检定研究院 2013-9-25, 吉林 长春 注册检验的内容及流程 2 生产工艺审查：“制造及检定规程”是否符合基本要求 生产及检定记录：是否符合制造及检定规程的描述 制品原液、半成品、成品的检验项目、方法、结果是否符合国家药品标准及企业标准的规定 制品包装、标签、使用说明书是否符合相关规定 国产疫苗注册 注册检验类型 新产品注册 工艺变更 核对新工艺（对应检测方法和指标） 质量标准变化 其它变更：规格，包装材料 一般不涉及标准和方法的变化 再注册（进口制品） 工艺、方法、标准无变化时，只进行核档 标准提高 3 原液抽样检测原则 作为成品检测的补充： 1.在成品中不检测 裂解剂等工艺中间步骤（灭活、纯化疫苗等） 制品的纯度、定性等（重组蛋白等） 2.在成品中无法检测： 联合疫苗（多价疫苗？） 佐剂疫苗（残余DNA、内毒素、宿主蛋白等） 根据以上原则，可以进行部分项目的检测 4 5 检定项目的设置及其意义 检定的意义在于保证制品的： 安全性→制品自身：如减毒活疫苗的神经毒力 →工艺引进：流感疫苗的裂解剂，抗生素 →工艺残留：制品残留，外部污染 →后期添加：防腐剂，稳定剂 有效性→制品的确认（鉴别试验，重组蛋白分子结构） →含量的测定（效力试验） 稳定性或一致性： →上述检测结果的分析(正确的指标，如活性比) →各级/项检测标准的区间 6 生物制品生产中检定项目的设置 包括： 1.起始原材料：毒种，细胞，佐剂，其它添加物质 2.生产过程：收获，纯化/提取，裂解等重要工艺过程 3.关键节点：原液、半成品、成品 紧紧围绕着制品本身的属性(类型、使用途径及目的)、控制节点，达到保证制品的质量的目的 7 以流感疫苗生产为例 鸡胚(9~11日龄) 流感病毒工作种子批 病毒接种鸡胚尿囊腔，培养48~72小时 病毒收获（尿囊液） 单型病毒收获液合并 病毒灭活 病毒超滤浓缩 鉴别，病毒滴度， 血凝滴度，无菌， 支原体 内毒素， 血凝滴度 病毒灭活验证 10 疫苗的类型与效力试验考虑要点 减毒活疫苗：OPV,MMR, JE,VZV 等 计算病毒数量（CFU, PFU, CCID50）,其效力可以预期 　　临床使用效果（前提？） 蛋白或多糖（提取、重组类）疫苗：HBV, HPV,流脑多糖 抗原性，免疫原性: 定性明确，结构稳定 体内试验（或由体内向体外方法过渡） 灭活病毒疫苗（包括裂解、纯化） 体内方法：狂犬疫苗（保护性抗原不明确） 体外方法：流感疫苗（保护性抗原明确） 11 体内攻击模型法 体内功能性抗体检测 体外免疫学方法检测 体外分析（理化）方法 与临床效果的相关性 一致性更加明显 各类效力试验方法的意义比较 12 以HPV 疫苗效力试验为例 Merck疫苗：体外方法 夹心ELISA方法测定抗原含量，其中第二个抗体针对中和表位 GSK疫苗：简化的体内方法 疫苗及参考品稀释后，采用单一剂量免疫小鼠，以间接ELISA法测定抗体滴度，计算疫苗和参考品的比值 国产疫苗：体内方法 疫苗系列稀释后免疫小鼠，每组10只鼠，采血测定假病毒中和抗体，计算半数感染剂量（ED50法） 13 体内方法和体外方法的比较 优点 缺点 体内法 可以发现潜在的抗原完整性的变化，尤其是当进行攻击试验或测定功能性抗体的情况下 1.变异大（试验有效的比例较低） 2.试验周期长（数周或数月） 3.费用高 4.不符合3R原则（replacement, reduction, refinement） 体外法 1.变异小 2.试验周期短（数小时 　或数天） 3.费用较低 4.符合3R原则 1.制品原因，可能无法建立，或与体内法一致性差 2.可能无法区分抗原完整性的微小差异。 14 体内效力试验的局限性 不同动物种属（品系）免疫应答不同：采用攻击模型难以预期保护效果 商业化疫苗的质量保证： －GMP －经过验证的生产工艺 －中间过程控制和放行检测 批签发中的效力试验用于： －确认生产过程的一致性 －确保商业化的批次与临床试验批次无差异，后者经过临床 试验证明其安全性及有效性 15 效力试验的策略 在制品的研发阶段→采用体内和体外两种方法 ： －建立疫苗