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2017第二章细胞的元素和无机盐
3.方法与步骤 (1)原理:还原糖 + 斐林试剂 砖红色沉淀。 (2)选材:苹果、梨、白萝卜。含糖量较高,颜色为白色或近于白色的植物组织。 (3)检测过程: 水浴加热 振荡混匀 50~65℃水浴 加热2min 2mL组织样液 刚配制的斐林试剂2mL 呈现浅蓝色 变成砖红色(Cu2O) 还原糖:含有半缩醛羟基的糖类,主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。蔗糖、淀粉和纤维素属于非还原糖。 水浴加热 现配现用 还原糖的检测结果 颜色变化:浅蓝色→棕色→砖红色 当质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液与质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液混合后,立即生成淡蓝色的Cu(OH)2悬浊液。 Cu(OH)2与葡萄糖、果糖、麦芽糖等可溶性还原糖共热,能够生成砖红色的Cu2O沉淀。因此,利用该反应,可证明样液中含可溶性还原糖。 R—CHO+2Cu(OH)2→R—COOH+Cu2O↓+2H2O 甲液乙液等量混合,现用现配,切不可分开滴加,或者久置后才用 苏三(苏丹Ⅲ)送了我一个橘黄色的胭脂(脂肪) 橘黄色小圆颗粒即为脂肪颗粒 (3)脂肪的鉴定: ①脂肪+苏丹Ⅲ→橘黄色 ②脂肪+苏丹Ⅳ→红色 ③观察脂肪液滴的方法:显微镜 二、脂肪的检测 (1)选材:经浸泡去种皮的花生种子。 (2)检测过程: 制片 选取最薄的切片置于洁净的载玻片中央 制成临时装片:滴1?2滴蒸馏水,盖上盖玻片 染色:在薄片上滴加2?3滴苏丹Ⅲ染液,染色2?3min 洗去浮色:用吸水纸吸去染液,滴加体积分数为50%的酒精1?2滴 镜检观察:在低倍镜下寻找到已着色的圆形小颗粒,然后用高倍镜观察。 苏三(苏丹Ⅲ)送了我一个橘黄色的胭脂(脂肪) 切片:花生种子(浸泡3-4h),去皮,将子叶削成薄片。 1ml 蛋白质的检测结果 斐林试剂与双缩脲试剂的比较 斐林试剂 双缩脲试剂 甲液 乙液 A液 B液 成分 0.1 g/mL NaOH溶液 0.05 g/mL CuSO4溶液 0.1 g/mL NaOH溶液 0.01 g/mL CuSO4溶液 鉴定物质 可溶性还原糖 蛋白质或多肽 添加顺序 甲乙两液等量混匀后立即使用(现配现用) 先加入A液1 mL,摇匀,再加入B液4滴(不能过量),摇匀 反应条件 50~65 ℃水浴加热 不需加热,摇匀即可 反应现象 样液变砖红色沉淀 样液变紫色 四、淀粉的检测: (2)选材:马铃薯匀浆 (1)原理:淀粉 + 碘 蓝色 (3)检测过程: 2 ml组织样液 2滴碘液 观察颜色变化 蓝色 蓝(蓝色)点(淀粉)点(碘) (1)斐林试剂很不稳定: 甲液 ( g/mL的NaOH溶液) 乙液 ( g/mL的CuSO4溶液) (2)双缩脲试剂的使用: A液( g/mL的NaOH溶液) B液( g/mL的CuSO4溶液) 0.1 0.05 使用时,临时配制,(甲液:乙液=1:1)混合 后立即使用(现配现用)。 0.1 0.01 3、注意事项: 使用时,先加试剂A液,造成碱性的反应环 境,再加试剂B液(分别配制,分别加入)。 (3)鉴定脂肪时应注意的问题: ①干种子,需浸泡3h—4h(浸泡时间短,不容易切片;浸泡时间过长,组织太软,切下的薄片不易成形)。 ②用苏丹Ⅲ(或苏丹Ⅳ)染液2~3滴,对花生子叶薄片染色3min,吸去染液,1~2滴体积分数为50%酒精洗去浮色,加水制片。 ③显微镜观察. 3、注意事项: 物 质 材料 试 剂 颜色反应 备注 还原糖 蛋白质 脂 肪 淀 粉 核酸 DNA RNA 苹果汁 豆浆 花生 马铃薯 口腔上 皮细胞 斐林试剂 双缩脲 试剂 苏丹Ⅲ 染液 碘液 甲基绿 吡罗红 砖红色沉淀 紫色反应 橘黄色 脂肪颗粒 蓝色 DNA呈绿色 RNA呈红色 在显微镜下观察 在显微镜下观察 三、生物组织中有机物质的鉴定 含还原性糖(葡糖糖、果糖、麦芽糖)多,组织材料颜色浅。 蛋白质含量多的材料 脂肪含量多并且便于徒手切片的材料 50~65℃水浴加热2分钟或沸水加热1’ 课本19第2题 1.分析下表,可推测 ( ) 【解析】双缩脲试剂、碘液、斐林试剂分别检测蛋白质、淀粉和还原性糖。据表可以推测,甲含有蛋白质,乙含有淀粉,甲和乙混合能够产生还原性糖,证明甲中所含蛋白质可能是淀粉酶,能将乙中淀粉分解成还原性糖。 D 溶液 双缩脲试剂 碘液 斐林试剂 甲 + - - 乙 - ++ - 甲、乙混合 + + + 注:“+”显色,“++”显色更深;“-”
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