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第五章 糖和苷 Carbohydrates and Glycosides 六、多糖的提取分离 ㈠提取 ㈠ 提取 1. 常用的提取方法 主要为溶剂提取法——水、稀醇（单糖、低聚糖、多糖）、酸水、碱水、酶法等 糖类的提取可根据它们对乙醇和水的溶解度不同，而采用冷热水、冷热稀醇等条件。 苷类分子的极性随着糖基的增多而增大。可根据其极性大小，来选择相适应的溶剂。 六、多糖的提取分离 ㈠提取 2. 提取过程中的注意事项 (1) 新鲜材料中水解酶对糖及苷类的水解作用. (2) 提取溶剂的酸碱性而引起的糖及苷类的水解 3. 破坏或抑制植物体内酶的方法： (1)直接用沸水、甲醇或乙醇进行提取. (2) 药材中加入一定量的碳酸钙拌和后再用沸水提取. (3) 新鲜材料采集后迅速加热干燥或冻干处理后再提取. 4. 多糖提取过程中的脱脂脱色 含脂或含色素较高的药材，可用甲醇或乙醇-乙醚混合溶液（1:1）或石油醚进行脱脂、脱色处理后，再用水提取。 六、多糖的提取分离 ㈡分离纯化 ㈡ 分离纯化 1．去除杂质：蛋白质、色素等 2．分离纯化方法： 1）季铵盐沉淀法 2）分级沉淀或分级溶解法 3）色谱法：凝胶柱色谱、 离子交换柱色谱 六、多糖的提取分离 ㈡分离纯化 1．去除杂质 1）蛋白质去除法 多糖中夹杂的蛋白质，通常选择能使蛋白质沉淀而使多糖不沉淀的试剂来处理，如： Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸、酚、鞣酸等。 六、多糖的提取分离 ㈡分离纯化 1．去除杂质 1）蛋白质去除法 六、多糖的提取分离 ㈡分离纯化 1．去除杂质 1）蛋白质去除法 六、多糖的提取分离 ㈡分离纯化 1．去除杂质 2）色素去除法 六、多糖的提取分离 ㈡分离纯化 ㈡ 分离纯化 1．去除杂质：蛋白质、色素等 2．分离纯化方法： 1）季铵盐沉淀法 2）分级沉淀或分级溶解法 3）色谱法：凝胶柱色谱、 离子交换柱色谱 六、多糖的提取分离 ㈡分离纯化 1）季铵盐沉淀法 季铵盐及其氢氧化物是一类乳化剂，常用于酸性多糖的分离。 六、多糖的提取分离 ㈡分离纯化 2）分级沉淀或分级溶解法 在糖的水溶液中，逐步加入乙醇（甲醇）或丙酮，可用于溶解度相差较大的多糖的分离。 为使多糖稳定，多糖通常在pH=7时进行 酸性多糖在pH=2~4时进行 处理酸性多糖时，为防酸水解苷键，操作宜迅速。 六、多糖的提取分离 ㈡分离纯化 3）凝胶柱色谱法 可将多糖按照分子大小和形状的不同分离开 ●常用商品名称及型号： 葡聚糖凝胶（商品名：Sephadex G） G-10、G-15、G-75、G-100等 [10—表示吸水量乘以10，即1.0ml/g的吸水量] 琼脂糖凝胶（Sepharose，Bio-Gel A） 聚丙烯酰胺凝胶（Bio-Gel P） 羟丙基交联葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20） （亲脂性，可在有机溶剂中进行分离的分子筛） 六、多糖的提取分离 ㈡分离纯化 操作过程： 除LH-20外，均在H2O中进行。 ① 将凝胶在适当的溶液中浸泡（多为洗脱剂）； ② 待充分膨胀后装入层析柱； ③ 上样后，用洗脱液洗脱； ④ 收集、回收溶液，干燥。 六、多糖的提取分离 ㈡分离纯化 洗脱溶剂的选择： 分离中性物质——水及电解质溶液 （酸、碱、盐溶液及缓冲液，I≥0.02） 阻滞较大的组分——水+有机溶液 （水-甲醇、水-乙醇、水-丙酮等） LH-20可用有机溶液进行溶胀 如：CHCl3、丁醇、二氧六环等 (应用：有机物质的分离，如：脂类、固醇类等) 六、多糖的提取分离 ㈡分离纯化 4）离子交换柱色谱法 1）应用： ① 除水提液中的酸、碱性成分和无机离子； ② 酸性、中性、粘多糖的分离 2）常用的离子交换树脂 ① 离子交换纤维素树脂 阴离子型：DEAE- Cellulose，DEAE-Sephadex， DEAE-Sepharose等 ② 硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂 3）离子交换剂对多糖的吸附力与多糖结构有关 4） 常用洗脱剂：不同浓度盐溶液、碱溶液、硼砂溶液 六、多糖的提取分离 ㈢ 多糖的提取分离实例