盘固草A254Digitariadecumbens细胞.PDF

台 灣 農 學 會 報 9(5)：４３３－４４５，２００８ Journal of the Agricultural Association of Taiwan 盤固草A254(Digitaria decumbens)細胞 ( ) 懸浮培養與植株再生1 (2)* (3) (4) (4) 摘　要 A254 Digitaria decumbens 盤固草 （ ）是台灣地區適應性相當廣的熱帶牧草，由於盤固草遺 傳組成為三倍體，花粉不稔。為加速傳統育種效率，期利用生物技術提供遺傳改良的另一個途 徑。因此，本研究主要建立具植株再生能力的細胞懸浮培養方法，以因應基因轉殖或突變育種 A254 2 mg/l 2,4-D 2,4-dichlorophenoxyacetic acid 之需。將盤固草 未成熟花穗，接種於含有 （ ） 0.5 mg/l BA N6-benzyladenine MS Murashige and Skoog’s 及 （ ）的 （ ）固體培養基，誘導的癒合 組織幾乎全部為白色結構緊密的胚性癒合組織，BA 顯著影響癒合組織的型態。一些透明鬆軟 的癒合組織，可持續繼代培養於含有 2 mg/l 2,4-D 的 MS 液體培養基，至少六個月以上。一旦 需要植株再生時，可於原懸浮細胞培養基添加 0.5 mg/l BA ，培養一週後，再移至含有2 mg/l 2,4-D 及 0.5 mg/l BA 的固體培養基，以誘導白色緊密的胚性癒合組織。將這些胚性癒合組織移 至含有 0.5 mg/l BA 或 0.05 mg/l TDZ 的 MS 培養基，分別含 88.9% 或 87.7% 的癒合組織可再生 為完整植株。本研究結果對盤固草基因轉殖非常重要且相當有益，因為可以在人為的控制下， 精準地促進細胞持續增殖，並保有高頻度的植株再生能力。 縮寫字：BA: N6-benzyladenine; CPPU: N-(2-chloro-4-pyridyl)-N-phenylurea; 2,4-D: 2,4-dichlorophenoxyacetic acid; KN: Kinetin MS: Murashige and Skoogs medium; TDZ: N-phenyl-N-1,2,3-thiadiazol-5-yl urea; 關鍵詞：植株再生、癒合組織形態、盤固草 (1) 1386 (2) (3) (4) * 961026 961119 961122 —433 — 台灣農學會報第九卷第五期 施意敏　等 J. Agri. Assoc. Taiwan 9(5) 前　言 近年來，以蛋白質為基礎的生物製劑類（Biopharmaceuticals ），其應用領域相當廣泛， 如口服疫苗、抗體、醫療診斷試劑、或治療藥劑等，以往這些蛋白質的商業生產以仰賴微生物 發酵或哺乳動物細胞株的生產為主，但這些生產方式有其缺點，如生產成本高、無法大量化生 產，及可能遭受動物性病源內毒素汙染等風險，尋求其替代的生產系統應運而生。 由於植物基因轉殖技術的進步，以植物作為生物製劑的生產系統正如火如荼的進行，特別 以穀類作物如玉米、水稻、大麥及小麥等的種子，作為醫藥蛋白質的生產載體，目前已進入商 品化大量生產的例子，包括以玉米種子生產促