原卟啉IX声动力学疗法对S180肿瘤细胞的杀伤效应研究.pdfVIP

原卟啉Ix一声动力学疗法对s180肿瘤细胞的杀伤效应研究 王筱冰 摘要肿瘤，特别是恶性肿瘤，是当前威胁人类健康的主要疾病之一。鉴于 对肿瘤的病因和发病机理尚不清楚，有关肿瘤的治疗方法都不能从根本上解决问 题。目前，治疗肿瘤的方法有很多种，包括放疗、化疗以及外科手术疗法等，以 超声激活血卟啉治疗恶性肿瘤的声动力疗法(Sonodynamic 中之一。 声动力疗法是在光动力疗法(Photodynamic 展起来的一种治疗癌症新方法。该疗法是利用超声具有穿透深部组织并能聚焦于 肿瘤部位的特性，激活相对无毒性且长时间富集于肿瘤组织的声敏剂，从而产生 抗肿瘤因子杀伤肿瘤细胞。相对于PDT而言，SDT治疗肿瘤具有较强的针对性和 对正常组织的无创伤性，因而具有良好的应用前景。近些年来，国内外学者就SDT 杀伤肿瘤的作用机理开展了多学科的研究工作，并取得一定成果，提出了一系列 声空化、自由基、脂质过氧化等理论机制，但其具体机制目前尚无定论。SDT可 能受多种因素的影响，不同的声敏剂、超声参数以及所研究的生物系统模型等可 能共同决定着其抗肿瘤的机制和疗效。 本论文在综合国内外研究进展的基础上，结合本实验室前期研究成果，依托 国家自然科学基金项目“超声激活血卟啉抗肿瘤的细胞分子生物学机制”和“超声激 活血卟啉诱导肿瘤细胞凋亡的分子生物学机制”的支持，采用频率为2．2MHz的聚 焦超声结合原卟啉IX(Protoporphyrin 进行研究，目前取得的实验结果如下： 1．测得实验所用原卟啉Ix的最大荧光激发波长为409ILITI，最大荧光发射波 长为605 摄取、滞留与清除等方面的动态变化过程，计算肿瘤组织和周围正常组织中PPIX 的存留比值；绘制肿瘤组织中PPIX浓度与其它各组织的浓度含量比值随时间的变 化曲线，选择最佳的超声处理时间点，最大限量地使聚焦超声激活肿瘤组织内的 PPⅨ并且降低对周围健康组织的损伤；实验结果表明静脉注射后24h为相对安全 的超声处理时间点。 2．通过研究不同强度超声以及不同剂量浓度的原卟啉Ⅸ对小鼠S180实体瘤 的生长抑制效应影响得出：超声强度为5 个阈值，在此条件下，超声处理对小鼠$180实体瘤有一定的抑制作用；超声结合 5 PPⅨ对在体S180肿瘤细胞的生长抑制作用随PPIX剂量的增加而增强，mg／kg 的PPIX表现为超声激活原卟啉lx协同作用的浓度闽值。 3．采用频率为2．2MHz、强度为5W／cm2的聚焦超声结合5 mg／kg原卟啉Ix 对在体S180肉瘤的损伤作用进行研究，实验结果表明：单纯5 mg／kg 肿瘤组织几乎没有生长抑制作用，单纯超声处理表现出轻微的肿瘤生长抑制效应， 而超声结合原卟啉IX对肿瘤组织的生长抑制效应随时间延迟表现更为明显，处理 后3天其肿瘤的大小基本上维持在对照组小鼠肿瘤大小的一半左右；比较不同处 明显，而超声结合PPIX处理组小鼠的平均存活时间显著高于其它三个实验组；同 坏了S180肿瘤细胞的结构特性，其损伤程度明显大于单纯超声处理组。 照强度、处理时间以及PPIX浓度均存在相对的损伤作用闽值：超声所诱导的细胞 损伤存在一个敏感阈值，为3W／cm2，当超声强度高于这一阈值时，细胞的破坏急 剧增强：原卟啉Ⅸ对于声动力学疗法诱导的细胞损伤存在相对较小的浓度剂量闽 明显，当PPIX浓度大于这一阈值时，二者的联合作用表现显著增强：同时，超声 处理时间也存在一定的阈值(30s)，小于这一阈值时，超声激活PPⅨ的联合作用 与单纯超声组无明显差别，大于这一阈值时，超声显著增强了PPIX的细胞毒效应。 5．强度为3 胞30S时，其对细胞的杀伤率达50．91％，而同等条件下单纯超声对细胞的杀伤率 下观察不同处理组细胞的形态学变化表明原卟啉Ⅸ．声动力学处理对S180肿瘤细 胞的损伤主要表现在胞质内有大量空泡形成、线粒体膨胀和嵴消失、胞膜破损、 胞质大量流失、核膜边界模糊及部分核膜破损出现核质流失、核内有空区、部分 染色质凝集等。因此可推测超声激活原卟啉Ⅸ对S180肿瘤细胞的损伤作用靶位 点主要集中在细胞质膜、核膜以及线