092406140-张会玲-microRNA在胚胎干细胞中的表达及作用_.ppt

microRNA在胚胎干细胞中的表达及作用 胚胎干细胞的来源 胚胎干细胞是最为原始的干细胞, 它来源于哺乳动物囊胚的内细胞团, 具有无限的自我更新 能力, 同时, 这种细胞是多能(Pluripotent)干细胞, 能够分化成为三胚层中任何一种细胞类型。 一、microRNAs microRNAs是一类内源性的非编码单链RNA, 含19~22个核苷酸, 能够通过与靶mRNA特异性的结合而导致靶mRNA降解或抑制其翻译, 从而对基因进行转录后调控。 microRNAs参与细胞生长、分化和凋亡, 在生物体发育和疾病过程中起重要的调控作用。通过microRNAs在干细胞中的作用研究, 可进一步阐明干细胞自我更新及分化过程的内在机制 二、microRNA 的生成和作用机制 microRNA相应的基因来源于染色体非编码蛋白区的一段, 由RNA聚合酶Ⅱ(RNApol Ⅱ)转录生成单顺反子或多顺反子初级转录物(Pri-miRNA), 其长度在100~1 000个核苷酸。Pri-miRNAs通过时序性加工, 生成成熟的miRNA 。 时序性加工一般分为两步 : 第一步在核内, Drosha RNase和DGCB8构成复合体将Pri-miRNA剪切成长度约70个核苷酸并具有茎环结构的miRNA前体(pre-miRNA)。Drosha行使RNA核酸内切酶的功能, DGCB8则能够直接结合Pri-miRNA, 稳定发夹结构, 指导Drosha的定向剪切。Pre-miRNA在GTP依赖的核质/细胞质转运蛋白Exportin5的作用下, 从细胞核运送到细胞质中; 第二步在胞质, Dicer将具有茎环结构的前体剪切成19~22个核苷酸长的miRNA: miRNA’双体。Dicer是RNaseⅢ超家族中一员, 是一种ATP依赖的核酸内切酶。 miRNA: miRNA’双体中一条链被降解, 另一条成熟的miRNA进入RNA诱导的基因沉默复合物(RNA-induced silencing complex, RISC)中, 形成非对称RISC复合物。该复合物会结合到靶mRNA的3′非翻译区(UTR), 阻断靶基因的翻译 . 大多数情况下, 成熟的miRNA和靶mRNA序列不完全互 补。哪一条链结合到RISC并不是完全随机的。在miRNA和互补链形成的双螺旋中, 两条链的3′端均有2个游离核苷酸, 并且两条链也不完全配对。miRNA靠近5′端有一个与互补链不匹配的突起, 这个突起显著的减弱了双链结构5′端稳定性。成熟miRNA的产生, 总是趋向于选择双链中5′端相对更不稳定的序列, 所以只有一条成熟的miRNA最终能结合到RISC中。 miRNA参与基因调控主要有两种方式, 即靶mRNA的降解和翻译抑制。当miRNA和靶mRNA接近完全互补时多采取第一种方式, 在植物中多见。而在动物中, 多数情况下miRNA和靶mRNA 3′非翻译区不完全互补配, 通过翻译抑制靶mRNA的表达。microRNA生成和作用的示意图见图1 三、microRNA的生成和作用机制 microRNAs在胚胎干细胞中特异性表达, 并且随着胚胎干细胞的分化, microRNAs表达谱也发生microRNAs进行检测, 发现三者部分重叠, 即明显变化。 最早是Houbaviy 等对小鼠未分化和已分化的胚胎干细胞以及成体细胞中所含的之间有有的miRNAs是三者共有, 有的是细胞类型特异性的。 如有6个(miR290、miR291、292、293、294、295)在胚胎干细胞中高表达, 在类胚体中低表达, 在MEF/NIH3T3中不表达。这6个microRNA成簇排列, 位于小鼠基因组中一段2.2 kb的区域。它们属于新发现的miRNAs, 先前未经报道。在ES细胞分化过程中, 这几个miRNAs表达下调或不表达。 在类似的研究中, Suh等 从人胚胎干细胞中分离出至少36个miRNA, 这些miRNA大部分都在人胚胎干细胞中特异性表达, 而在已经分化的胚胎细胞或成体组织中不表达。这36个miRNA中有17个是首次报道, 有3个(miR-296、miR-301、miR-302)与Houbaviy等报道的相似。1个miRNA(miR-302)是小鼠胚胎干细胞、人胚胎干细胞和人胚胎肉瘤细胞所特有的。 Morin等用通量平行测序的方法, 对人胚胎干细胞和类胚体的RNA比较, 发现171个已知miRNAs和23个新发现的miRNAs在两者之间呈现明显差异 Laurent等采用新的microRNA芯片平台, 对人胚胎干细胞和多种干细胞及分化细胞的microRNA表达谱进行研究, 发现一组特异性调控hESCs的microRNA, 这些microRNA多位于较大的基因簇中, 很