大叶秦艽（Gentiana macrophylla Pall）的组织培养及离体诱导多倍体的研究.pdfVIP

摘要 本研究以大叶秦艽幼苗叶片为材料，对其进行了离体组织培养研究． 结果表明：靠叶片基部的叶片切块是最适的外植体，在附加2．0mg／L2， 4-D和o．5mg／LKT的惦培养基上出愈率最高，可达95％以上。附加1．5唱／L 2，4-D，0．2 mg／L6一BA和500mg／LLH的螨培养基既是胚性愈伤组织 最佳诱导培养基，也是良好的继代培养基．诱导胚状体最适培养基为：1／2 骼+o．1 2，4-D+2．06一BA+500 mg／L mg／L mg／LuI．当胚状体发育到子 叶胚时期用镊子轻轻取下，转接到MS。培养基上，两周后即可发育出具根、 茎、叶的完整秦艽小苗。 对大叶秦艽胚性愈伤组织分离的原生质体进行了培养，获得了初见分 化的愈伤组织。研究结果表明，新转代7d的黄色颗粒状愈伤组织为获得大 量有活力(8096)原生质体的最佳状态．渗透剂为0．4M甘露醇，2％(霄／v)蔗 糖时，原生质体以3．5×105／m1植板密度培养于附加有1．5mg／L 2，4-D，0．2mg／L6一队，和500mg／LLH的DPD培养基中进行液体浅层培养， 分裂频率可达40％左右．由原生质体获得的愈伤组织在附加有0．1mg／L LH的lIs固体培养基上可分化出芽． 2，4-D，2．Omg／L5-BA，500nlg／L 研究还以大叶秦艽胚性愈伤组织为材料，通过将不同浓度的秋水仙素 加入培养基和用不同浓度的秋水仙素溶液浸泡两种方法处理胚性愈伤组 织，筛选出了比较合适秦艽诱导多倍体的方法和最适的秋水仙素浓度及处 理时问。经染色体数目检查表明，这两种方法都能有效地诱导出四倍体细 胞(4n=4x=52)的产生。但是用液体浸泡法获得的变异率高于加入培养基 法，并以初见分化的胚性愈伤组织为诱导材料效果较好，当用0．1％秋水仙 素溶液处理6h时，植株有形态变异的高达46．4％。 关键词：大叶秦艽 胚性愈伤组织 胚状体 原生质体培养 植株再生 多倍体诱导 ¨ Abstract of Pall．as theleavesGentiana Using macrophynaexplanttheembryogenic calliwereinducedand were for regeneratedplants produced．Theproperway leaf was-70％ethanol 10～12minOr70％ sterilization 25S+0．1％HgCl2 40S 8min．Thebase tobe ethanol leaf Was thebest 4-0．1％HgC[2 proved fortheinitiationofcalli．The mediumforcallusinductionWas explants optimal theMSmediumaddedwith KTand I．H．The 2．0mg／L2争D’0．5mg／L 500mg／L rateofcallusinductionWasto95％．Whentheinducedcalliweretransferred up andculturedontheMSmedi