大鼠局灶性脑缺血Ncadherin mRNA转录及蛋白表达和脐血间充质干细胞移植的研究.pdfVIP

中文摘要 i nmRNA 第一部分大鼠局灶性脑缺血再灌注N-cadher 转录及蛋白表达 背景和目的 急性缺血性脑血管病是一种高发病率、高致残率的 临床常见病。越来越多的证据已经证明患病后机体发生了一系列自我 修复过程。包括神经细胞发生、突触再生，神经环路重建等可塑性变 化。N．cadherin作为钙依赖性细胞粘附分子亚家族的一个成员，于个 体发育阶段在控制机体形态发生方面担负着重要的角色。它涉及神经 元间的粘连、神经细胞的分化、迁移、神经突起的外生、轴突成束、 组织结构的稳定性。它是否也参与了急性缺血性脑血管病发病后患病 机体的自我修复尚未见有国内外文献报道。本研究的目的是为了观察 大鼠局灶性脑缺血损伤后脑组织神经细胞内N．cadherinmRNA转录 及N．cadherin蛋白表达水平的变化。 方法 采用线栓法制作成年SD大鼠大脑中动脉供血区局灶 性缺血再灌注模型，采用原位杂交染色及免疫组织化学染色技术观察 缺血再灌注后不同时间点脑组织不同部位神经细胞内N-cadherin mRNA的转录及蛋白表达。 结果 ①大鼠局灶性脑缺血再灌注l天、4天梗死中心区及 周边N．cadherin 灌注7天N．cadherin 11天、14天、2l天N．cadherin mRNA表达明显上调，以14天组最 高。同侧海马部位在缺血再灌注后N-cadherinmRNA未见下调，于7 天后开始高于正常组(P0．01)，并在其后的观察阶段一直维持在较 高水平。②大鼠缺血再灌注1天、4天缺血梗死区及周边N．cadherin 阳性细胞数皆低于假手术组，有统计学意义；7天后N．cadherin阳性 细胞率有所上升，与l天组相比有一定差异(P0．05)：11天、14天、 细胞率与假手术组相比差异不明显(P皆0．05)；7天后开始上升并 明显高于假手术组(P0．01)，11天达高峰，此后维持在较高水平。 结 论 脑缺血再灌注后缺血中心区及周边和同侧海马部位 N—cadherin mRNA的转录及蛋白表达水平有明显变化，提示 N—cadherin可能参与了脑缺血后脑组织的可塑性变化。 [关键词]脑缺血，钙依赖性神经细胞粘附分子，神经可塑性 II 第二部分大鼠局灶性脑缺血后脐血间充质千细胞 移植的研究 背景与目的 干细胞移植治疗脑血管病日益受到人们的重视。 干细胞来源多取白骨髓问充质干细胞，局部脑内注入是主要途径。考 虑骨髓间充质干细胞来源有限，反复多次脑内注入移植干细胞临床上 是病人难以接受的，而脐血间充质干细胞与骨髓间充质干细胞特征相 似，体外培养诱导后可向神经细胞方向分化，因而我们决定以脐血间 充质干细胞作为干细胞来源，从静脉途经注入，观察大鼠大脑中动脉 阻断后脐血间充质干细胞在脑组织内的分布及分化情况。 方法 通过线栓法制作成年雄性SD大鼠MCAO模型。模型 成功后于缺血再灌后l天、7天从静脉注入被标记好的3×106个脐血 间充质干细胞。于注射后14、28天将大鼠处死并制作脑组织切片， 用荧光显微镜观察脑组织切片上用Dapi标记过的脐血间充质干细胞 的分布；采用免疫组化双重标记染色观察经Brdu标记过的脐血间充 质干细胞在脑组织中的分化情况。 结果 1、在缺血一侧的脑组织中有一些的Dapi阳性标记细 胞存在，与对侧相比有明显差异(pO．01)。2、移行到脑组织中的经 Brdu标记过的脐血间充质干细胞显示出向神经细胞分化的现象， 占比例约为5％、2％、7％。3、同G组大鼠相比，接受了脐血间充质 天时，其运动功能受损的评分值较低，其中以2l天、28天两个时间 点有显著性差异(p0．05，p0．01)。 111 结论1、脐血问充质干细胞静脉注射后能向缺血脑组织中迁 移并部分分化成神经细胞。2、静脉注射脐血问充质干细胞治疗大鼠 局灶性脑缺血可能有助于神经功能的恢复。 [关键词]脐血间充质干细胞，静脉注射，移植，脑缺血