大菱鲆Turbot微卫星标记的筛选与应用.pdfVIP

大菱鲆(Turbot)微卫星标记的筛选及应用 摘 要 本研究利用微卫星标记，以亲缘关系较远的大菱鲆父母本杂交构建的一个 Fl家系为作图群体，构建了大菱鲆遗传连锁图谱并对相关生长性状如：体长，体 重，体厚进行了QTL分析。本研究的具体内容如下： 1、采用富集文库．菌落原位杂交的方法构建大菱鲆微卫星富集文库，共筛选 得到952个克隆，通过序列比对和重复序列筛查，得到含有重复序列的独立克隆 753个，占全部克隆数的79．10％。通过talldem repeatsfinder(TI心)软件的进一步 筛查，得到1004个含串联重复序列的位点，其中微卫星位点831个(82．77％)， 小卫星序列位点173个(17．23％)。利用实验室设计的软件对序列进行分析，得 到结论如下：1)微卫星重复序列中，重复序列数目所占比例与累计长度的所占 比例情况基本一致，两碱基重复类型累计长度所占的比例最大，其次是四碱基、 三碱基、六碱基和五碱基类型，而单碱基重复类型在本研究中鲜有发现；2)重 复单位拷贝数变异能力分析表明，变异系数最大的是三碱基；3)重复序列重复 0．072)，即随 单位长度与其拷贝数的相关分析表明，二者呈负相关(，=．0．5，p 着重复单位的增加，其拷贝数在减少。以上结果为物种之间微卫星分布频率和丰 度的比较、微卫星标记的开发及微卫星进化和功能的研究等工作提供基础。 2、本研究利用了富集文库．菌落原位杂交的方法开发的653个微卫星标记， 利用含有Fl代亲本在内的多个个体对位点进行多态性评价，共得到284个多态 性的位点，其中158个标记在所构建图谱家系亲本间具有多态性，分别有125 个和118个标记可用于母本和父本遗传连锁图谱的构建。卡方检验显示，母本分 15个标记符合孟德尔1：1 离标记中有偏分离标记(P0．01)10个(8．0％)，其它l 分离规律可用于连锁分析；父本分离标记中有偏分离标记(PO．01)13个(11．O％)， 其它105个标记符合孟德尔l：1分离规律可用于连锁分析。利用父母本的分离 标记，分别对大菱鲆母本和父本作图。所构建的母本连锁图谱共30个连锁群， 110个标记连锁群总长度为919．1cM，平均标记间隔为12．9cM。所构建的父本 连锁图谱共21个连锁群，110个标记连锁群总长度为721．7cM，平均标记间隔 cM，覆盖率为35．5％； 为9．9cM。根据计算，母本连锁图谱的预期长度为1695．0 cM，覆盖率为48．2％。连锁分析结果显示， 父本连锁图谱的预期长度为1137．3 大菱鲆母本遗传连锁图谱比父本遗传连锁图谱长49．O％，这可能说明大菱鲆不同 性别存在不同的重组率。 利用所构建的图谱对大菱鲆体长，体重和体厚进行QTL定位。在父本连锁图 谱上仅检测得到一个可能与体长相关的QTL。QTL定位，为我们从事今后的分子 标记辅助育种工作提供了参考。 maximus L．)，微卫星，富集文库，连锁图谱， 关键词：大菱鲆(ScophthaImus OLT定位 DeveI racteri zati onand I i cati onof opment，cha app lI markersi n Turbot microsatei te maximus Imus L．) (Scophtha Abstract