大肠杆菌双顺反子表达载体中各基因转录与表达水平的研究.pdfVIP

摘要 从20世纪70年代初期基因克隆技术建立至今，短短几十年的时间，基因克 隆技术发展十分迅猛，迄今已有很多外源基因被克隆到不同的表达载体中，进行 各种研究，以期造福人类…。构建多顺反子表达载体，研究原核生物多顺反子不 同间隔区对外源基因表达效率的影响，将对多基因共表达具有一定的指导意义。 本研究从大肠杆菌基因组序列出发，对其多顺反子间隔区多种形式和序列进 行分析。实验室已有以报告基因一一p．半乳糖苷酶(GAL)和绿色荧光蛋白(GFP) 表达水平，以GAL的酶活力衡量GAL的表达水平，最终用蛋白质电泳进行验证。 结果显示，双顺反子表达载体中不同的间隔序列不仅对位于下游的顺反子gfp的 表达水平有影响，对位于上游的顺反子lacZ的表达水平可能也有一定的影响， RBS位点有利于下游的顺反子gfp的表达。同时选取pET28a．gfP为研究对象， 转录水平随诱导时间的延长没有明显变化。我们设计的这种双顺反子的表达规律 是否适用于其他外源基因，还有待于更多的应用来证实，但至少对于双顺反子载 体的构建提供了一个借鉴。 关键词：大肠杆菌双顺反子半定量RT-PCR p半乳糖苷酶绿色荧光蛋白 ABSTRACT Since70伽in whenthe of was built，it twentycentury technologygenecloning hasbeen beenclonedinto have greatlyimproved．Now，manyexogenousgenes different vectorsforkinds ofresearch．Theconstructionof expression polycistron research vectorand on affected expression exogenous geneexpressionefficiencyby different of in willbe to on spacerspolycistronsprokaryotesimportantstudy multigenecooperativeexpression． This intendsto the of of inE． study analysespacersequencespolycistronsgenome coll．Aseriesofrecombinant bici witha stronof fluorescent plasmids green protein GALhadbeenconstructedinE bicistron (GFP)and coli，includingexpression plasmidpET28a-lacZ—gfpD(nospacerbetween加and starcodonof