大金发藓Polytrichum commune Hedw的资源利用和组培过程的若干问题研究.pdfVIP

communeHedw．) 大金发藓(Polytrichum 的资源利用和组培过程的若干问题研究 摘要 commune Hedw．)隶属于苔藓植物门、藓纲、金发藓科、金 大金发藓(P01)-trichum 发藓属，世界性分布。由于植株较大，分布广泛，在生物学基础理论和药用开发方面具 有重要价值。同时大金发藓具有的药用价值，高效的NH4+同化作用和对土壤氮循环的潜 在作用，也引起了国内外专家的极大重视。本项目旨在搞清楚：1)浙江金华产的大金发 藓的挥发油主要化学成分；2)野外自然条件下大金发藓种群对分布地土壤特性的影响； 3)适合大金发藓的组培技术；4)包括培养基、PH、光照时问、温度等在内的大金发藓孢 子萌发和原丝体生长的最优条件；5)不同激素对大金发藓愈伤组织诱导及对原丝体生长 的影响：6)氮沉积对原丝体和配子体诱导的影响。通过这此研究工作，期望找到大金发 藓资源最优的再生技术和方法，一方面使其能够用于药物开发利用，也能为苔藓植物的 生理、遗传、发育和进化研究提供实验材料。 1．利用GC．MS分析法对大金发藓的醚类提取物进行分析。经计算机标准质谱库检 索，在提取物中共鉴定出61种化合物(匹配度均兰80％)。根据所检测到的化合物的峰 面积经过面积归一化法，确定了各组分的相对含量。所鉴定的化学成分含量占色峰谱面 积的99．96％。大金发藓的醚类提取物主要以烷烃类、烯烃类、醇类、酮类和苯类、酸 类等酯类化合物为主。其中含量相对较高的有十八碳二烯酸(亚油酸)(21．225％)、油 酸(20。988％)、棕榈酸(10．118％)、二十四烷六烯(8。275％)、花生四烯酸(3。6％)和 萘(2．544％)等。实验中还首次在大金发藓的醚类提取物中分析到了8．丙氧基．柏木烷， 贝壳杉烯两种萜类化合物。在大金发藓的醚类化合物中也存在着大量的低于C23的烷烃 如十七烷、十八烷和十九烷等。 2．采用土壤混合取样法对裸地土壤和大金发藓分布地土壤的特性进行了研究。发现 大金发藓的生长能显著地降低土壤pH，对电导率、含水量和有机物含量则没有显著影 响。大金发藓对土壤中尿酶和过氧化氢酶也没有显著影响，但是能显著降低蔗糖酶的活 性。大金发藓生长对土壤呼吸没有显著差异，但使土壤中的放线菌数量下降，是裸地的 0．8倍，而细菌和真菌数量上升，含量分别是裸地的1．9倍和2．5倍；大金发藓的生长会 使土壤的固氮菌和硝化细菌明显上升，其含量分别是裸地的2．9倍和6．7倍。 3．研究了组培条件下培养基类型、蔗糖浓度、光照强度、温度和重金属pa2’对大金 发藓孢子萌发的影响。结果表明：1)大金发藓的孢子除了NM和BM能够在SM，MS， KM培养基中萌发，光照对孢子萌发率并没有显著影响，除了在只含有蔗糖的培养基中， 光照抑制了孢子的萌发；2)在只含有蔗糖和只含有矿质元素的培养基中，大金发藓的 孢子萌发率较低，而在含有蔗糖和矿质元素的培养基中，孢子的萌发率较高；3)大金 萌发：4)培养基中营养物质的丰富度对孢子的双极萌发具有一定的影响。分析发现， 组培条件下大金发藓孢子萌发所需的上述条件与其在野外生长的环境条件有密切的联 系。 4．研究了组培条件下培养基、光照强度、温度、植物激素、大金发藓自身水提取液 及碳氮浓度对大金发藓原丝体生长的影响。结果表明：大金发藓原丝体生长最快的培养 进原丝体的生长，而6-BAP则抑制原丝体的生长而促进芽体的诱导；大金发藓配子体自 身的水提取液对其原丝体生长起抑制作用；碳氮浓度对原丝体生长的影响非常显著，在 BM培养基上最有利于原丝体生长的的碳氮浓度比为10：0．2(C：N)，当碳氮浓度比小于 10：0．2(C：N)或者氮浓度为0时，原丝体的生长受到抑制。 5．研究了组培条件下不同氮源和碳氮浓度对大金发藓外植体诱导配子体的影响。结 著，每茎段都能诱导产生4．3至4．9个新配子体。培养基中的碳(sucrose)浓度(091～， 10 gl～，0．2gl～，0．4gl‘1)及两者结合作用对外植体诱导的 gl～，40gl。)、氮(NH4N03)浓度(0 配子体数都有显著影响，每茎段能诱导产生1．3至7．0个新配子体。缺氮会严重抑制了 配子体的诱导，适当的高浓度NH4有利